PRMT5在磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解中的作用和机制研究.pdfVIP

PRMT5在磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解中的作用和机制研究

摘要

目的：探究骨组织局部蛋白质精氨酸甲级转移酶5（Proteinarginine

methyltransferases5,PRMT5）在磨损颗粒刺激下的假体周围骨溶解（Periprosthetic

Osteolysis,PPOL）中的作用以及相关机制。构建小鼠颅骨骨溶解模型来模拟假体周围骨

溶解的发病过程，造模过程中于颅骨表面植入钛颗粒模拟磨损颗粒刺激，后经过相关实

验检测PRMT5相关指标来明确其作用和相关机制，进而在临床治疗方便提供新的思路。

方法：第一部分：收集PPOL患者行髋关节翻修手术取出的界膜组织、股骨颈骨折

患者行关节置换取出的滑膜组织，将组织处理后进行HE（苏木精伊红）染色、免疫组

化实验，观察两类组织中炎症水平以及PRMT5的表达情况并对比是否有差异；通过蛋

白印记、实时荧光qPCR技术定性的检测并对比两类组织中PRMT5的表达以及其表达

差异性。第二部分：取6w龄雄性C57小鼠30只，构建钛颗粒诱导的颅骨骨溶解模型，

将30只小鼠随机分组分为3组（10只/组），分别为：对照组（Control）、钛颗粒组（Titanium

particles）、治疗组（EPZ）。其中治疗组在造模3天后经腹腔注射EPZ溶液（EPZ015938

文中简称EPZ，为PRMT5特异性抑制剂，可抑制PRMT5的表达，EPZ溶液溶质为EPZ

粉末，溶剂为玉米油与二甲基亚砜按比例混合后溶解），每3天注射1次，其余两组注

射等剂量溶剂，同样为3天/次，共注射2周。小鼠处死后取出颅骨组织，应用HE染色

定性观察3组小鼠颅骨骨组织中的炎症表达情况及细胞及组织形态，应用TRAP（抗酒

石酸酸性磷酸酶）染色观察各组小鼠破骨细胞表达情况并对比其差异性；通过Micro-CT

观察3组颅骨局部骨组织骨量减少情况以及计算颅骨表面孔隙比率等指标；采用蛋白质

印记、PCR检测3组颅骨中的PRMT5、破骨细胞相关基因、RANKL信号通路的表达

情况，比较各组之间表达是否存在差异。收集数据，并将结果通过SPSS进行统计学分

析，P0.05认为数据差异存在意义。

结果：第一部分：HE染色结果示界膜组织炎症表达情况明显高于滑膜组织，WB、

PCR结果示：在界膜组织与滑膜组织中，PRMT5均有表达且界膜组织中PRMT5的表

达水平高于滑膜组织。第二部分：HE染色结果示：TI组颅骨周围组织的炎症表达情况

高于Con组与EPZ组。TRAP染色示：同Con组、EPZ组相比，TI组颅骨组织中破骨

细胞数目明显升高；通过对于颅骨组织ROI（RegionsOfInterest，关注区）定量分析，

同Con组相比，TI组中ES/BS（侵蚀表面积）、OC.s/BS（破骨细胞表面积）、破骨细胞

数量显著增加，而EPZ组，上述指标与TI组相比均减小。Micro-CT结果示，TI组与

EPZ组颅骨均有侵蚀，TI组颅骨侵蚀程度明显高于EPZ组，对比各组组表面孔隙率、

BMD（骨基质密度）、BV/TV（骨体积分数）结果示：同Con组相比，TI组颅骨表面

孔隙率明显上升，BMD、BV/TV明显下降；EPZ组与TI组相比，颅骨表面孔隙率下降，

BMD、BV/TV升高。蛋白质印记与qPCR结果示，同Con组相比，TI组PRMT5的表

达水平明显升高，EPZ组PRMT5的表达水平要明显低于TI组；同Con组相比TI组破

骨细胞相关基因mRNA表达水平、RANKL通路蛋白以及mRNA表达水平明显升高，

EPZ组与TI组相比的上述参数表达情况明显降低。

结论：在因PPOL行全髋翻修手术的患者的界膜和因股骨颈骨折行关节置换手术患

者的滑膜中都存在PRMT5的表达，同时PRMT5在界膜中的表达更加明显。动物实验

结果可得，PRMT5可调控RNAKL信号通路中部分因子的表达水平，影响破骨细胞的

代谢过程，参与小鼠颅骨骨溶解发生过程，EPZ的治疗作用是通过控制PRMT5的表达，

最终对小鼠颅骨的骨溶解进行干预。