DB21T 2591-2016 口蹄疫病毒非结构蛋白单抗阻断ELISA 检测方法　.docxVIP

ICS11.220B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2591—2016

口蹄疫病毒非结构蛋白单抗阻断ELISA检测方法

MonoclonalantibodyblockingELISAdetectionmethodoffoot-and-mouthdiseasevirusnonstructuralproteinantibody

2016-03-18发布2016-05-18实施

辽宁省质量技术监督局发布

I

DB21/T2591—2016

目次

前言 III

1范围 1

2规范性引用文件 1

3缩略语 1

4检测方法 1

4.1器材 1

4.2试剂 1

4.3试验步骤 2

4.4结果判定 2

4.4.1有效性判定 2

4.4.2阻断率（Inh%）的计算 2

4.5判定标准 2

4.5.1猪血清样品 2

4.5.2牛、羊血清样品 2

5废弃物处理 2

附录A（资料性附录）主要试剂配方 3

附录B（规范性附录）采样与样品处理注意事项 4

II

DB21/T2591—2016

前言

本标准根据GB/T1.1-2009的有关规定进行制定。本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准由辽宁省质量技术监督局发布。

本标准负责起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院、世纪元亨生物技术有限公司。

本标准起草人：杨本勇、赵晓彤、艾纯民、刘坤洋、李井春、杨作丰、张雅为、邓文超、孙明、陈西钊、赵铁柱、夏伟

1

DB21/T2591—2016

口蹄疫病毒非结构蛋白单抗阻断ELISA检测方法

1范围

本标准规定了口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）的检测方法、判定标准、废弃物处理等技术要求。

本标准适用于猪、牛、羊口蹄疫病毒感染的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

GB16548－2006病害动物和病害动物产品生物安全处理规程。

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

ELISA酶联免疫吸附试验（Enzymelinkedimmunosorbentassay）；

FMDV口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus)；

FMDV-NS口蹄疫病毒非结构蛋白；

OD450nm值450nm波长处的吸光值。

TMB3，3′,5，5′四甲基联本胺

4检测方法

4.1器材

量程为100μL的精确微量移液器，200μL8或12通道微量移液器，一次性移液器吸头，96孔血清稀释板，37℃避光孵育箱，1000mL量筒（配制洗涤液用），振荡器，酶标仪（含450nm波长滤光片），自动或手动洗板系统，吸水纸。

4.2试剂

包被有口蹄疫病毒非结构蛋白抗原的96孔ELISA板；辣根过氧化物酶标记的抗口蹄疫病毒抗原的单克隆抗体；含有0.05%（体积分数）Tween-20的磷酸盐缓冲液（PBS－T），0.01mol/L，pH7.4,配制方法见附录A.1章；含有0.1%（质量浓度）牛血清白蛋白的PBS-T，使用当日配制；含有TMB及过氧化氢尿素的柠檬酸-磷酸盐缓冲液，配制方法见附录A.2章；2mol/L硫酸溶液，配制方法见附录A.3章；本标准所用化学试剂除另有特殊规定外，均为分析纯。试剂配制用水需满足GB/T6682的要求。取动物全血，

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DB21/T2591—2016

待血液凝固后，4000r/min离心10min，收集血清。要求血清清亮，无溶血。（血液采集与样品处理注意

事项见附录B）

4.3试验步骤

4.3.1在稀释板上按1：1的体积比稀释待检血清（100μL样品稀释液+100μL待检血清）。

4.3.2在记录表上记录阳性对照、阴性对照和样品的位置。分别在相应孔中加入阳性对照（2孔）和阴性对照（3孔）原液（不