蛋白质的空间结构.ppt

蛋白质的等电点(isoelectricpoint,pI)当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质较稳定，其溶解度、导电性、黏度、渗透压等皆最小（制备或沉淀蛋白质），在电场中不移动（分离蛋白质）。第63页，共115页，星期日，2025年，2月5日在不同的pH环境下，蛋白质的电化学性质不同。在等电点偏酸性溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动；在等电点偏碱性溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动。利用蛋白质两性电离的性质，可通过电泳、离子交换层析、等电聚焦等技术分离蛋白质。第64页，共115页，星期日，2025年，2月5日电泳蛋白质在等电点pH条件下，不发生电泳现象。利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。第65页，共115页，星期日，2025年，2月5日例题根据蛋白质等电点，指出下列蛋白质在所指定的pH条件下，电泳时的泳动方向：?(1)胃蛋白酶(pI?1.0)，在pH?5.0；带负电，向正极泳动?(2)血清清蛋白(pI?4.9)，在pH?6.0；带负电，向正极泳动?(3)α-脂蛋白(pI?5.8)，在pH?5.0和pH?9.0；?在pH?5.0时带正电，向负极泳动；在pH?9.0带负电，向正极泳动第66页，共115页，星期日，2025年，2月5日2蛋白质的胶体性质蛋白质属于生物大分子，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。因此，它在水中能够形成胶体溶液。*蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面电荷水化膜第67页，共115页，星期日，2025年，2月5日+++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜++++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉第68页，共115页，星期日，2025年，2月5日蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。第69页，共115页，星期日，2025年，2月5日3蛋白质的沉淀作用蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量大小、所带的电荷和水化作用有关。改变溶液的条件，将影响蛋白质的溶解性质，在适当的条件下，蛋白质能够从溶液中沉淀出来。第70页，共115页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的沉淀作用根据蛋白质的亲水胶体性质，当其环境发生改变（加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层）时，蛋白质的胶体溶液就不再稳定并将发生沉淀作用(Precipitation)。沉淀法具有部分纯化、浓缩特点。第71页，共115页，星期日，2025年，2月5日3蛋白质的沉淀作用（1）可逆沉淀：在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。蛋白质发生沉淀后，用透析等方法除去沉淀剂，可使蛋白质重新溶于原来的溶液中。在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。第72页，共115页，星期日，2025年，2月5日因为蛋白质分子量大小不同、表面所代电荷不同、表面的亲水和疏水区域不同，所以可以通过可逆沉淀法将蛋白质分离出来。可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。第73页，共115页，星期日，2025年，2月5日3蛋白质的沉淀作用（2）不可逆沉淀：在强烈沉淀条件下，蛋白质发生沉淀后不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水，不易再溶于强酸和强碱中，不能用透析等方法除去沉淀剂后使蛋白质重新溶于原来的溶液中。由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀。第74页，共115页，星期日，2025年，2月5日使蛋白质沉淀的试剂：1.高浓度中性盐：（NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl这种加入盐中和蛋白质的电荷，使蛋白质沉淀析出的现象称为盐析，用于蛋白质分离制备。2.有机溶剂：丙酮、乙醇破坏蛋白质水膜3.重金属盐：Hg2+、Ag+、Pb+与蛋白质中带负电基团形成不易溶解的盐4.生