食品中微生物数量的检测技术与指示菌类.ppt

菌落总数的测定

－－平板菌落计数法程序菌落计数选择2～3个适当稀释度悬液各1ml，加入无菌空培养皿内，每个稀释度做2～3个培养皿用生理盐水进行无菌稀释，做成几个适当稀释倍数的悬液每个培养皿中倾注约15ml熔化并冷却到46℃左右的平板计数琼脂培养基，冷却后，于37℃培养48h被检样品报告结果第23页，共69页，星期日，2025年，2月5日（一）样品采集1、采样原则：确定性、随机性、代表性、无菌操作、原始性2、采样方法：无菌操作，分类操作有包装食品应采用完整的未开封的样品粉末状样品边混合边取样液体样品振摇均匀取样冷冻样品保持冷冻状态非冷冻样品保存在0~5℃第24页，共69页，星期日，2025年，2月5日3、采样数量和部位：（1）即食类预包装食品：取相同批次最小零售原包装（2）非即食类预包装食品：500g或500mL取相同批次最小零售原包装500mL液态食品混匀后，从相同批次的不同容器中取≥5倍检验单位样品500g固体食品从同一包装的不同部位分别取样（3）散装或现场制作食品根据食品不同类别和性质，取≥5倍检验单位样品第25页，共69页，星期日，2025年，2月5日4、采样标记：及时、准确、清晰填写采样单（包括采样人、采样地点、时间、样品名称、来源、批号、数量、保存条件等信息）。5、采样的贮存和运输：应在接近原温条件下尽快送检，并保持样品完整。如不能及时运送，应在接近原温条件下贮存。第26页，共69页，星期日，2025年，2月5日代表单位（章）代表单位（章）签字签字日期年月日日期年月日×××××采样单第27页，共69页，星期日，2025年，2月5日（二）送检认真核对登记样品信息应按要求尽快检验。如不能及时检验，应采取必要措施保持样品原有状态冷冻食品45℃以下不超过15分钟，或2~5℃不超过18h解冻后检验不得加入防腐剂保存第28页，共69页，星期日，2025年，2月5日（三）样品的处理和稀释1）取样无菌操作25g（mL）放入225mL无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液中（1:10稀释液）2）均匀混合无菌均质杯8000~10000r/min均质1~2min，或用拍击式均质器拍打1~2min第29页，共69页，星期日，2025年，2月5日第30页，共69页，星期日，2025年，2月5日3）稀释第31页，共69页，星期日，2025年，2月5日4）倾注平板稀释液移入平皿后，将46℃左右的平板计数琼脂培养基注入平皿约15ml，转动平皿。第32页，共69页，星期日，2025年，2月5日第33页，共69页，星期日，2025年，2月5日第34页，共69页，星期日，2025年，2月5日5）倒置培养琼脂凝固后，翻转平板细菌：一般食品36±1℃48h水产品30±1℃72h霉菌：28±1℃5d第35页，共69页，星期日，2025年，2月5日（四）菌落计数法肉眼观察（直接、放大镜）利用自动影像分析菌落计数仪第36页，共69页，星期日，2025年，2月5日10-1均数10-2均数描述最终结果25536均在30~300间则按计数公式2.6×103多不可计345各平板均300，取稀释度最高者报告，余计为多不可数3.5×104122均小于30则取稀释度最低者报告1.2×10233029所有平板均不在30~300CFU且一部分30或300者以最接近30或300者报告2.9×10300所有平板均无菌落则记为1乘以最低稀释倍数报告1×10即10结果表述第37页，共69页，星期日，2025年，2月5日（五）菌落计数的报告报告单位：cfu/g(mL)1、平板菌落数的选择：30~300cfu2、菌落数的计算：3、菌落数的报告：低于30时按实数报告100