常用生物化学检验技术.pptVIP

电泳的分类*11、根据被分离的样品多少分为分析电泳

制备电泳22、根据电泳时电压的高低分为高压电泳（50V/cm以上）常压电泳（50V/cm以下）3、根据电泳媒介的不同分为自由电泳（溶液）区带电泳（支持介质）4、根据电泳系统是否均一分为连续电泳

不连续电泳影响电泳的因素*分子的形状和性质电场强度电场强度大，速度快，产热多，变性；电场强度小，速度慢，产热少，区带模糊3、缓冲液*组成成分pHpH与pI比较，4.5-9.0,正极pH负极离子强度离子强度越大，缓冲容量越大，pHmol/L5、蒸发作用6、样品支持物吸附作用电渗作用电泳仪*由直流电源和电泳槽两部分组成。直流电源一般由交流电经过整流获得

恒压电源

恒流电源

恒功电源盖贰电泳槽壹支架肆电极及电极室叁常用的区带电泳*STEP1STEP2STEP3STEP4滤纸电泳（PE已淘汰）醋酸纤维薄膜电泳（CAE）琼脂糖凝胶电泳（AGE）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）区带染色电泳区带的测定*1溴酚蓝、丽春红（蛋白质）2PMS-NBT系统（同工酶）3苏丹红、苏丹黑（血浆脂蛋白）4溴化乙啶（核酸）区带定量*光密度扫描法洗脱比色法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳**常用生物化学检验技术光谱分析技术电化学技术电泳技术层析技术离心技术自动生化分析技术光谱分析*概念：利用物质具有吸收、发射或散射光谱谱系的特点，对物质进行定性或定量的分析方法光谱分析技术*010203发射光谱火焰光度法、原子发射光谱法、荧光光谱法吸收光谱紫外、可见光、红外光及原子吸收分光光度法散光光谱比浊法**透光度与吸光度*分光光度技术的基本原理T=I/IOT%=T×100%A=-lgT=-lgI/IO=lgIO/ILambert-Beer定律A=KLC适用用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体ε（摩尔吸光系数）：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时波长下的吸光度值分光光度计的基本结构*01光源02单色器03比色杯04检测器05显示器光源*光源应在一定光谱区域内发射出连续光谱，有足够强度和稳定性010203可见光分光光度计——钨灯紫外光光度计——氢灯单色器*将光源的复合光分散为单色光的装置棱镜滤光片光栅比色杯*玻璃或石英01光径为0.1~10cm,一般为1cm02校准03检测器*光电管及光电倍增管02光信号转为电信号01显示器*01检流计、微安表、记录器透光度和吸光度02数字显示器透光度和吸光度和浓度操作方法*开关——打开比色池盖子——20分钟预热1选定预定波长2空白、校准或待测液放入比色池，空白置于光路中3开光于T位，打开比色池盖子，粗、细调T为0.0关上比色盖子，调T为100.04开关于A，用消光调零5重复步骤4和56将校准或待测液光路中测A7分光光度技术的定量方法*比较法2标准曲线法1条件变应重新绘制标准品纯且准待测液吸光度超过线性范围，应稀释再测待测液与标准曲线条件相同CU=(AU×CS)/AS火焰光度法(原子发射光谱)*原理标本原子（基态）→激发态→释放光能→不同原子有不同特征光谱线→浓度与发射光强度成正比钠的特征谱线为589nm钾的特征谱线为767nm***电泳*溶液中带电粒子在直流电场中向电性相反电极移动的现象称为电泳。01利用带电粒子在电场作用下定向移动的特性，对混合物组分进行分离、纯化和测定的技术称为电泳技术。02电泳技术*COO-HCNH3+RCOO-HCNH2RCOOHHCNH3+RH+H+OH-OH-pH=pIpHpIpHpI原理人血清蛋白的等电点和电泳迁移率蛋白质等电点电泳迁移率cm2.s-1.v-1

白蛋白4.845.9×10-5

球蛋白5.065.1×1