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附录E

（资料性）

室内质控品的制备和使用

E.1阳性对照制备和要求

E.1.1制备材料

E.1.1.1血浆样本的阳性对照

首选HIV感染者血浆，也可使用HIV阴性人血浆稀释的HIV毒株培养上清液，或者使用HIV阴性人血浆

稀释的人工制备的质粒、重组病毒或假病毒。

E.1.1.2干血斑样本的阳性对照

首选HIV感染者的全血制备干血斑阳性对照，也可用HIV阴性人全血稀释HIV毒株培养上清液制备。

E.1.2主要技术指标

E.1.2.1亚型

包括我国主要HIV-1流行亚型，如CRF07_BC、CRF01_AE、CRF08_BC、B、CRF55_01B或当地流行亚型。

E.1.2.2耐药突变

在HIV-1的逆转录酶和/或蛋白酶和/或整合酶区带有主要耐药基因突变。

E.1.2.3病毒载量

血浆样品阳性对照的病毒载量可设定为低（200~1000copies/ml）、较低（1001~5000copies/ml）、

中（5001~50000copies/ml）、高（50000copies/ml）四个水平；干血斑样品阳性对照的病毒载量

可设定为1000~10000copies/ml，或10000copies/ml。

对上述技术指标应至少检测3次，准确鉴定HIV-1基因亚型、耐药基因突变和病毒载量。

E.1.3制备方法

常规方法采集全血、血浆或收获病毒培养上清液，用HIV阴性的人全血或血浆稀释成特定的病毒载

量水平，制备成稀释的血浆样本或干血斑。注意稀释样本应充分混匀，全血不能溶血；最好一次制备可

满足较长时间（一年）使用的量；血浆样本分装，干血斑样本置于含干燥剂的密封袋中，-70℃保存。

E.2阴性对照的制备和要求

E.2.1制备材料

E.2.1.1血浆样本的阴性对照

HIV核酸阴性人血浆。

E.2.1.2干血斑样本的阴性对照

HIV核酸阴性人全血。

E.2.2制备方法

常规方法采集人全血或血浆，制备干血斑，最好一次制备可满足较长时间（一年）使用的量；血浆

样本分装，干血斑样本置于含干燥剂的密封袋中，-70℃保存。

E.3质控品的使用

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E.3.1使用时机和数量的总体要求

从核酸提取纯化开始，将质控品随机加入待检样品中，每批次均加入阳性对照和阴性对照，一般每

50份样本应至少使用1份阳性对照和1份阴性对照，可根据预估的污染风险、实验室条件及人员操作的熟

练程度，适当增加阳性对照或阴性对照的数量。质控品与待检样本同步操作，直到完成耐药突变检测和

耐药解释，从而实现对检测全程的监控。

进行RT-PCR时，应增加由去离子水代替模板的空白对照，用于监控实验室污染。

E.3.2阳性对照的使用

E.3.2.1亚型选择

应选择待检人群或当地主要流行基因亚型所对应的阳性对照。

E.3.2.2耐药基因突变的选择

根据待检人群的抗病毒治疗史及使用的药物，选择含有在待检人群中预计流行率最高的耐药突变

的阳性对照。

E.3.2.3病毒载量的选择

预计实验室的技术水平较低时，例如初建的实验室、新上岗技术人员等，可选择高水平病毒载量的

阳性对照；技术成熟的实验室一般可使用低水平病毒载量的阳性对照；待检样本病毒载量低可加入低病

毒载量的阳性对照；每批次均加入阳性对照，有条件的实验室可适当增加阳性对照比例，如每50份样本

使用2~3份中、低病毒载量的阳性对照，或含低、中、高水平病毒载量的阳性对照。

E.3.3阴性对照的使用

每批次均加入阴性对照，预计实验室污染风险较高时，如不久前曾发生过污染、或限于客观条件实

验室分区不严格、或人员操作经验不足等，可增加使用阴性对照的数量，如每50份待检样本使用2~3份

阴性对照，随机混入待检样本中。

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