基因表达载体的构建课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第3章基因工程工程第2节基因工程的基本操作程序（第二课时）

新课导入抗干旱水稻的形成根据视频及已学的知识，思考回答：1、基因工程的基本工具是什么？2、基因工程操作的对象是什么？抗干旱水稻的目的基因是什么？抗干旱基因为什么不可以直接放入水稻细胞内？分子手术刀：限制性核酸内切酶分子缝合针：DNA连接酶分子运载体：质粒等操作对象：DNA分子目的基因：抗干旱基因

新课推进抗干旱水稻的形成合作探究一：抗旱基因为什么不能直接放入水稻细胞？1、游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解；2、就算可以进行转录和翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂进行复制，导致子代细胞不再含有目的基因。那怎样才能让抗干旱基因在水稻细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时还能使目的基因能够在受体细胞中表达和发挥作用？核心构建基因表达载体----分子运输车

位置：功能：新课推进抗干旱水稻的形成合作探究二：分子运输车（基因表达载体）是由哪些元件组成？各元件的作用？本质：位置：功能：人们所需要的基因基因的下游（一段特殊的DNA片断）终止mRNA的转录DNA片段基因的上游RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNADNA复制所需结构用来鉴别或筛选含有重组DNA分子的细胞请同学们阅读课本80页，自主在导学案空白环状质粒上绘制基因表达载体各组成部分，讨论并写出各部分的作用。

新课推进抗干旱水稻的形成合作探究三：请你为抗旱基因私人订制一辆分子运输车，利用手中的材料，你将如何设计？EcoRⅠ识别位点限制性核酸内切酶DNA连接酶目的基因空白质粒-GAATTC--CTTAGG--GAATTC--CTTAAG-模拟基因表达载体的构建

新课推进抗干旱水稻的形成合作探究三：请你为抗旱基因私人订制一辆分子运输车，利用手中的材料，你将如何设计？限制酶切割位点EcoRⅠ识别位点-GAATTC--CTTAGG--GAATTC--CTTAAG-1、利用EcoRⅠ酶切割抗旱基因和运载体时，需要注意什么？不能破坏目的基因、启动子、终止子复制原点和至少保留一个标记基因。5-AGCGAATTCTATCATTCTAGACTC-33-GCACTTAAGATAGTAAGATCTGAG-5

新课推进抗干旱水稻的形成-AGCG-GCACTTAAAATTCTAT-GATA-表达载体空白质粒启动子终止子-AGCGAATTCTATCATTCTAGACTC--GCACTTAAGATAGTAAGATCTGAG--AGCG-GCACTTAAAATTCTAT-GATA-合作探究三：请你为抗旱基因私人订制一辆分子运输车，利用手中的材料，你将如何设计？AATTCTTACAT.........ATCTCTAGACTCGAGGAATGTA.........TAGAGATCTGAGCTCTTAA抗旱基因AATTCTTACAT...........ATCTCTAGACTCGAGGAATGTA..........TAGAGATCTGAGCTCTTAA抗旱基因

新课推进抗干旱水稻的形成AATTCTAT-GATA--AGCG-GCACTTAA2、除了目的基因和运载体反向连接的异常情况外，是否还有其他的异常情况？（最多考虑两两连接）单酶切割时连接的情况是否正常目的基因与目的基因连接√目的基因自身环化×质粒-目的基因反向连接×质粒-目的基因正向连接×质粒自身环化×3、如何利用简单的方法来提高质粒-目的基因的正向连接效率呢？AATTCTTACAT...........ATCTCTAGACTCGAGGAATGTA..........TAGAGATCTGAGCTCTTAA抗旱基因

新课推进抗干旱水稻的形成EcoRⅠ识别位点-GAATTC--CTTAGG--GAATTC--CTTAAG-XbaⅠ识别位点-TCTAGA--AGATCT--TCTAGA--AGATCT-限制酶切割位点5-AGCGAATTCTATCATTCTAGACTC-33-GCACTTAAGATAGTAAGATCT