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第十二章高效毛细管电泳HighPerformanceCapillaryElectrophoresis
A电泳:一个“自由”的带电粒子在一定介质中在电场作用下的迁移。B淌度,μep:表述物质电泳特性的参数,与粒子电荷、质量、半径、介质等有关。12.3基本概念
电渗,μeo:由于粘滞阻力的存在,离子的电泳会带动溶剂同向运动。正负离子当量数相同时,溶剂受到大小相等方向相反的作用力,因此通常观测不到溶剂的运动。若设法使某种离子不运动,则作用于溶剂的力便失去了平衡,溶剂发生单向流动,这种流动称电渗。
在不考虑相互作用的前提下,粒子在毛细管介质中的运动速度是泳流速度和渗流速度的矢量和。一般情况下,电渗流速度是电泳流速度的5-7倍,混合物中所有的组份随电渗流朝一个方向迁移。μeo电渗淌度式中E:场强μep电泳淌度
2原理电渗流方向:高电位低电位正溶质离子所受的力:电场力+电渗力负溶质离子所受的力:电场力?电渗力中性分子所受的力:电渗力溶质迁移方向由电场力和电渗力的矢量和决定,一般来说,溶质迁移方向与电渗流同。流出顺序:①正离子②中性粒子③负离子
高压(+)?Θ?Θ?Θ?Θ?Θ?Θ?Θ?Θ电渗流(-)地柱效:N=5.54(tR/W1/2)2tR、W1/2取同一单位通常采用石英毛细管柱,一般情况下,表面带负电荷。当其与溶液接触时,在溶液中产生了一种过剩的正电荷与上述的负电荷平衡。在电场作用下,这层正电荷向负极移动,带动溶剂裹着溶质分子一起移动。ΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘ
12.3高效毛细管电泳仪器装置图清洗记录检测器高压电源毛细管电解液
12.3.1高压电源0-30KV输出,恒压恒流,正负极性可调。Pt丝电极?12.3.2进样系统重力(高度差)进样负压进样电渗法进样?12.3.3分离系统毛细管:I.D.50?m-75?m,长30-100cm
商品仪器:UV-VIS,加石英聚焦镜;激光荧光实验室:质谱,电分析12.3.4检测系统般用负压法,NaOH洗液,减少吸附清2.3.5清洗系统
常规区带电泳(CZE)胶束电动毛细管色谱(MECC)毛细管离子分析12.4分类
4.1常规区带电泳(CZE)01电解质缓冲液,正高压02分离阳离子和大分子阴离子03可控制变量:04操作电压05电解液06柱长07
4.2胶束电动毛细管色谱(MECC)揉合了毛细管电泳和液相分配色谱的原理,将表面活性剂加到电解液中,溶质分子进入体系后在胶束相和水相之间进行分配,不同的溶质分子因电泳速度和分配系数的不同而分离。
MECC体系存在着类似于色谱的两相,一是流动的水相,另一相是移动的“固定相”—胶束相,溶质在这两相之间分配。01主要用于分离中性分子,正高压02中性分子单靠电渗流,能移动,但不能分离。03没有分配上的差异是不行的。04
表面活性剂的浓度足够大时,单体结合在一起,形成一个球体,称为胶束,这个足够大的浓度称为临界浓度。SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-
加电渗流改性剂使电渗流反向,用于淌度很大的离子的分离,主要是无机阴离子的分离。负高压。01加阳离子表面活性剂,e.g.十六烷基三甲基溴化铵0212.4.3毛细管离子分析
电渗流ΘΘΘΘΘΘΘΘΘΘX-X-X-X-X-(-)高压(+)地
5应用及前景特点:分离效率高:?104理论塔板数,接近GC分离速度快:优于LC,接近GC进样量少:nL可分离GC受限制的物质
点:应用:药物分析:旋光异构体生化分析:氨基酸衍生物、蛋白、DNA环境分析:PAH、阴离子、酚
检测器的创新预浓缩富集技术利用电泳原理富集阴阳离子C18等吸附剂在线应用移植成熟的液相色谱技术于毛细管电泳中展趋势:
D、微流控分析,FIA与CE的结合90年代兴起。几平方厘米芯片,通道宽20-100?m,深10-30?m。进样pL-nL,几百伏电压,几十秒钟完成分离。发展趋势:
反应通道废液进样点试样通道试剂杯
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