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核酸的酶促降解和核苷酸代谢第1页,共28页,星期日,2025年,2月5日
第一节核酸的酶促降解一、核酸酶二、限制性内切酶核酸酶核苷酸酶核苷磷酸化酶核酸核苷酸核苷碱基+戊糖-1-P磷酸第2页,共28页,星期日,2025年,2月5日
核酸酶
1、核酸酶的分类(1)根据对底物的专一性分为(2)根据切割位点分为核糖核酸酶(RNase)脱氧核糖核酸酶(DNase)非特异性核酸酶核酸内切酶核酸外切酶2、核酸酶的作用特点第3页,共28页,星期日,2025年,2月5日
外切核酸酶对核酸的水解位点5′ppppOHBpppp3′BBBBBBB牛脾磷酸二酯酶(5′端外切5得3)蛇毒磷酸二酯酶(3′端外切3得5)第4页,共28页,星期日,2025年,2月5日
内切核酸酶对RNA的水解位点示意图5′ppppOHPyPuPyPy1′pppGACUpppGA3′RNAaseIRNAaseIRNAaseT1RNAaseT1Pu:嘌呤Py:嘧啶第5页,共28页,星期日,2025年,2月5日
限制性内切酶
?类型?命名?意义原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列,并在此序列的某位点水解DNA双螺旋链,产生粘性末端或平末端,这类酶称为限制性内切酶(ristrictionendonuclease)。第6页,共28页,星期日,2025年,2月5日
常用的DNA限制性内切酶的专一性酶辨认的序列和切口说明‥‥AGCT‥‥‥‥TCGA‥‥‥‥GGATCC‥‥‥‥CCTAGG‥‥‥‥AGATCT‥‥‥‥TCTAGA‥‥‥‥GAATTC‥‥‥‥CTTAAG‥‥‥‥AAGCTT‥‥‥‥TTCGAA‥‥‥‥GTCGAC‥‥‥‥CAGCTG‥‥‥‥CCCGGG‥‥‥‥GGGCCC‥‥BamHIAluIBglIEcoRIHindⅢSalISmaI四核苷酸,平端切口六核苷酸,平端切口六核苷酸,粘端切口六核苷酸,粘端切口六核苷酸,粘端切口六核苷酸,粘端切口六核苷酸,粘端切口第7页,共28页,星期日,2025年,2月5日
限制性内切酶类型I型:分子量大于105,多亚基,需S-线苷蛋氨酸、ATP和Mg2+,识别位点与切割位点相差甚远,产物为异质,是限制与修饰相排斥的多功能酶.Ⅱ型:分子量小于105,需Mg2+,切割位点位于识别位点上,产物为专一性片段,不具修饰酶功能。现在分子生物学研究所用的限制性内切酶均为此类。ⅡI型:识别位点为5-7bp的非对称序列,切割位点在顺序之外离识别序列5-10bp,切割双链,个别也切割单链。是限制与修饰相多功能酶.第8页,共28页,星期日,2025年,2月5日
限制性内切酶的命名和意义EcoRI序号属名种名株名例:EcoRI,这是从大肠杆菌(Ecoli)R菌珠中分离出的一种限制性内切酶限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外重组等研究中不可缺少的工具,是一把天赐的神刀,用来解剖纤细的DNA分子。第9页,共28页,星期日,2025年,2月5日
第二节核苷酸的降解二、嘧啶的降解一、嘌呤的降解核苷酸酶核苷磷酸化酶核苷酸核苷碱基+(脱氧)戊糖-1-P磷酸第10页,共28页,星期日,2025年,2月5日
嘌呤的分解第11页,共28页,星期日,2025年,2月5日
嘧啶的分解第12页,共28页,星期日,2025年,2月5日
第三节核苷酸的合成代谢一、核糖核苷酸的生物合成二、脱氧核糖核苷酸的生物合成三、单核苷酸转变成核苷二磷酸和核苷三磷酸(自学)四、各种核苷酸的相互转变第13页,共28页,星期日,2025年,2月5日
核糖核苷酸的生物合成1、嘌呤核苷酸的生物合成(1)从头合成途径(2)补救途径(自学)2、嘧啶核苷酸的生物合成(1)从头合成途径(2)补救合成途径(自学)第14页,共28页,星期日,2025年,2月
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