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细胞破碎技术试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.以下哪种细胞破碎方法属于机械破碎法？

A.渗透压休克法

B.酶解法

C.高压匀浆法

D.化学渗透法

2.高压匀浆法破碎细胞的主要机制是？

A.利用超声波的空化效应破坏细胞膜

B.通过高速旋转的珠粒撞击细胞

C.依靠高压下的剪切力与空穴效应导致细胞破裂

D.通过改变溶液pH使细胞壁溶解

3.对于酵母细胞（细胞壁较厚），最适宜的破碎方法是？

A.渗透压休克法

B.高压匀浆法（100-150MPa）

C.低功率超声波破碎（50W，5min）

D.冻融法（-20℃/37℃循环2次）

4.超声波破碎时，为避免目标产物因过热失活，关键操作是？

A.延长单次超声时间

B.降低超声频率

C.增加样品体积

D.采用间歇超声并冰浴冷却

5.溶菌酶破碎细菌的作用靶点是？

A.细胞膜上的磷脂双分子层

B.细胞壁中的肽聚糖β-1,4糖苷键

C.细胞质中的核糖体

D.细胞核内的DNA

6.珠磨法破碎细胞时，影响破碎效率的关键参数不包括？

A.珠粒直径（0.1-1mm）

B.珠粒装填量（80-90%）

C.搅拌转速（2000-4000rpm）

D.缓冲液pH（7.0-7.4）

7.化学渗透法破碎细胞的原理是？

A.通过有机溶剂溶解细胞膜脂质

B.通过高压迫使细胞内外渗透压失衡

C.通过机械剪切力破坏细胞壁

D.通过酶解反应水解细胞壁成分

8.冻融法破碎细胞的主要适用对象是？

A.革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）

B.动物细胞（如HeLa细胞）

C.酵母菌（如酿酒酵母）

D.放线菌（如链霉菌）

9.评价细胞破碎效果的常用指标不包括？

A.破碎率（显微镜计数法）

B.目标产物释放量（酶活测定）

C.溶液电导率变化

D.细胞培养液的初始OD600值

10.以下关于非机械破碎法的描述，错误的是？

A.酶解法特异性高，对目标产物损伤小

B.渗透压休克法仅适用于细胞壁较薄的革兰氏阴性菌

C.化学渗透法需控制试剂浓度以避免目标产物变性

D.冻融法破碎效率高，适用于大规模工业生产

二、填空题（每空1分，共20分）

1.细胞破碎的核心目的是破坏________和________，使胞内产物释放到液相中。

2.机械破碎法主要包括________、________、________和________四类。

3.高压匀浆法的操作压力通常为________MPa，破碎次数一般为________次，过高压力可能导致________。

4.超声波破碎的关键参数包括________、________、________和________，其中________是影响温度升高的主要因素。

5.酶解法常用的酶包括________（破坏细菌细胞壁）、________（破坏酵母细胞壁）和________（降解植物细胞壁）。

6.渗透压休克法的操作步骤为：将细胞悬于________溶液中平衡，再快速转移至________溶液中，因________导致细胞破裂。

三、简答题（每题8分，共40分）

1.比较机械破碎法与非机械破碎法的优缺点（从破碎效率、适用范围、成本、对目标产物影响四方面分析）。

2.简述超声波破碎细胞的原理及主要影响因素。

3.酶解法破碎细胞时，需注意哪些关键问题？请列举3点并说明原因。

4.渗透压休克法为何通常仅适用于革兰氏阴性菌？革兰氏阳性菌需如何处理才能用此方法？

5.如何通过实验验证细胞破碎是否完全？请描述具体操作步骤（至少3种方法）。

四、论述题（每题15分，共30分）

1.某实验室需从大肠杆菌（革兰氏阴性菌，胞内表达重组蛋白）中提取活性完好的目标蛋白，拟采用高压匀浆法破碎细胞。请设计完整的破碎工艺方案，包括预处理、参数优化、破碎效果检测及产物保护措施，并说明各步骤的科学依据。

2.比较动物细胞、酵母细胞和放线菌的细胞壁/膜结构差异，针对这三类细胞分别推荐一种最适宜的破碎方法，并解释原因（需结合细胞结构与破碎方法的作用机制）。

五、综合应用题（30分）

某生物制药企业计划规模化生产重组人胰岛素（胞内表达于大肠杆菌BL21），需选择细胞破碎工艺。已知：

-目标蛋白对温度敏感（30℃易变性）；

-大肠杆菌湿菌体量为100kg/批次；

-需控制破碎液中核酸、多糖等杂质含量（避免后续纯化困难）。

请