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肺炎球菌荚膜多糖中C多糖的定量1H-NMR和31P-NMR法测定

李香a，田光宗a，秦春君a，胡静b，傅俊杰a*，尹健a,c*(江南大学，a.生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室，b.医学院，c.生命科学与健康工程学院，江苏无锡214122)

摘要：目的利用1H-NMR和31P-NMR核磁定量法测定肺炎球菌荚膜多糖中C多糖残留量。方法采用BrukerAVANCENEO600MHz核磁共振波谱仪，以六甲基磷酰胺(hexamethylphosphoramide，HMPA)作为内标物，对不同血清型及不同浓度荚膜多糖溶液中C多糖进行定量1H-NMR和31P-NMR分析。结果在定量1H-NMR中二甲基亚砜的回收率为96.52%~103.31%，RSD值均2.00%，表明定量1H-NMR具有较好的准确度和精密度。在定量1H-NMR中，当荚膜多糖样品浓度9mg·mL?1时满足信噪比要求，而定量31P-NMR中测定浓度需15mg·mL?1。对于7F型荚膜多糖在浓度15~25mg·mL?1时2种方法测定结果差异无统计学意义。而对于4型荚膜多糖在浓度为3~15mg·mL?1时定量1H-NMR测定结果差异无统计学意义。通过定量1H-NMR和31P-NMR法测定多种不同血清型荚膜多糖中C多糖含量，结果显示，19种血清型荚膜多糖中C多糖含量为0.57%~5.07%。结论以HMPA为内标建立的C多糖定量1H-NMR和31P-NMR测定法，其操作简单，准确性高，重复性好，可作为肺炎球菌C多糖残留量检测的一种有效手段。

关键词：肺炎链球菌；C多糖；定量1H-NMR；定量31P-NMR；六甲基磷酰胺

中图分类号：R284.1；R917.101文献标志码：B文章编号：1007-7693(2025)13-2195-08

DOI:10.13748/ki.issn1007-7693引用本文：李香,田光宗,秦春君,等.肺炎球菌荚膜多糖中C多糖的定量1H-NMR和31P-NMR法测定[J].中国现代应用药学,

2025,42(13):2195-2202.

DeterminationofPneumococcalC-polysaccharideinCapsularPolysaccharidesfromStreptococcusPneumoniaebytheQuantitative1H-NMRand31P-NMRMethod

LIXianga,TIANGuangzonga,QINChunjuna,HUJingb,FUJunjiea*,YINJiana,c*(JiangnanUniversity,a.KeyLaboratoryofCarbohydrateChemistryandBiotechnology,MinistryofEducation,SchoolofBiotechnology,b.SchoolofMedicine,c.SchoolofLifeSciencesandHealthEngineering,Wuxi214122,China)

ABSTRACT:OBJECTIVEToestablishamethodfordetectionofthecontentofresidualC-polysaccharide(C-Ps)inthecapsularpolysaccharidefromStreptococcuspneumoniaebythequantitative1H-NMRand31P-NMRmethod.METHODSAllNMRexperimentswerecarriedoutonBrukerAVANCENEO600MHzspectrometerusinghexamethylphosphoramide(HMPA)asinternalstandard.Quantitative1H-NMRand31P-NMRanalysisofC-Psindifferentconcentrationssolutionofm