DB37T 3112-2018 猪伪狂犬病毒环介导等温扩增检测技术.docxVIP

ICS65.020.30

B41DB37

山东省地方标准

DB37/T3112—2018

猪伪狂犬病毒环介导等温扩增检测技术

Loop-mediatedisothermalamplificationforPseudorabiesVirus

2018-02-02发布2018-03-02实施

山东省质量技术监督局发布

I

DB37/T3112—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。

本标准起草人：李俊、时建立、彭喆、吴晓燕、张玲玲、郑书轩、徐绍建、孙文博、于江、丛晓燕、韩红、吴家强、杜以军、陈蕾、陈智、刘畅。

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DB37/T3112—2018

猪伪狂犬病毒环介导等温扩增检测技术

1范围

本标准规定了猪伪狂犬病毒(PseudorabiesVirus,PRV)的环介导等温扩增(Loop-mediated

isothermalamplification,LAMP)检测技术的操作步骤。

本标准适用于猪伪狂犬病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

LAMP

环介导等温扩增技术。

3.2

BstDNAPolymerase

嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶。

3.3

SDS

十二烷基硫酸钠。

3.4

4SGreenPlusNucleicAcidStain

无毒型核酸染色剂。

4材料及设备

4.1主要仪器设备

4.1.1微量移液器(最大量程分别为10μL、20μL、100μL、1000μL),带滤芯的枪头。

4.1.220000r/min低温高速离心机。

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DB37/T3112—2018

4.1.3电热恒温水槽。

4.1.4稳流稳压电泳仪。

4.1.5水平电泳槽。

4.1.6凝胶成像系统。

4.1.7紫外透射反射分析仪。

4.1.8电磁炉。

4.1.9烧杯(1000mL)。

4.1.10电子天平精度为：0.001g。

4.2主要试剂或材料

4.2.15mol/LBetaine溶液：配制见附录A.1。

4.2.2BstDNAPolymerase(8U/μL)。

4.2.3SYBRGreenI核酸染料。

4.2.40.5×TBE缓冲液：配制见附录A.2。

4.2.52%琼脂糖电泳液：配制见附录A.3。

4.2.64SGreenPlusNucleicAcidStain。

4.2.7DNAMarker2000。

4.2.810%SDS溶液：配制见附录A.4。

4.2.9超纯水：符合GB/T6682,三级。

4.2.10引物

猪伪狂犬病毒LAMP检测引物：

F3:5’-ACGAGCCCCGCTTCCA-3’。

B3:5’-AGATGCAGGGCTCGTACA-3’。

FIP:5’-AGACCACGCGCGCGGCATCAG-CTTCCACTCGCAGCTCTTCT-3’。

BIP:5’-GAGAACTTCACCGCCACGCT-CGTAGTACAGCAGGCACCG-3’。

5检测步骤

5.1样品采集与处理

采集