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第46卷第10期中国预防兽医学报Vol.46No.10

2024年10月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineOct.2024

doi：10.3969/j.issn.1008-0589.202403009

镰形扇头蜱防御素的原核表达及其抑菌活性的分析

崔濮凡，张永英，宋登阔，石玉祥，钟翠红，权陶芬，李书德，王方方*

（河北工程大学生命科学与食品工程学院，河北邯郸056000）

摘要：为分析镰形扇头蜱防御素RhD的生物学功能和抑菌活性，本研究利用在线网站预测RhD的分子生物学

特性，采用MegAlign软件分析GenBank中不同物种防御素氨基酸序列之间的相似性，利用MEGA7构建不同物种防

御素氨基酸序列的系统进化树。结果显示，RhD基因开放阅读框为225bp，编码75个氨基酸，具有Knot1结构域、

信号肽，为疏水蛋白。RhD的二级及三级结构均为α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲等结构，且与变异革蜱防御素

（Q86QI5.1.A）三级结构相似性最高。不同物种防御素氨基酸序列的相似性结果显示，RhD与血红扇头蜱防御素的相

似性最高为93.2%，变异度最低为7.1%；与长角血蜱防御素的相似性为82.4%，变异度为20.1%，与其余物种防御素

相似性较低，且变异度较高；不同物种防御素氨基酸序列的系统进化树结果显示，RhD与血红扇头蜱防御素、长角

血蜱防御素位于同一进化分支，与黑腹果蝇、埃及伊蚊、家蚕等防御素同属一大分支。采用PCR从镰形扇头蜱唾液

腺中扩增已切除信号肽编码基因的RhD基因，克隆至表达载体pET-30a中构建重组质粒pET30a-RhD，并经PCR和

测序鉴定正确后，转化E.coliBL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导后利用镍离子亲和层析柱纯化重组RhD蛋白

（rRhD），采用SDS检测rRhD的表达及纯化效果，使用BCA蛋白定量试剂盒测定纯化后rRhD浓度，采用

westernblot鉴定rRhD的反应原性。SDS结果显示，在15ku处出现目的蛋白条带，且其主要以可溶性形式表

达，纯化后rRhD浓度约为110µmol/L。Westernblot显示在15ku处出现特异性条带，与His标签单克隆抗体（MAb）

的反应原性较强。分别利用牛津杯法和微量二倍稀释法检测RhD（110µmol/L~1.72µmol/L）对常见3种细菌的抑菌活

性。结果显示，rRhD对大肠杆菌和沙门菌的平均抑菌圈直径基本一致，但均极显著低于阳性对照组（硫酸卡那霉素）

（P0.01），对金黄色葡萄球菌的平均抑菌圈直径显著低于阳性对照组（P0.05），但对3种菌的平均抑菌圈直径均极

显著高于阴性对照组（P0.01）；rRhD对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为13.75µmol/L、

27.5µmol/L和55µmol/L，最小杀菌浓度分别为27.5µmol/L、27.5µmol/L和110µmol/L。本研究首次经原核系统表达

了分泌型的rRhD，并证实其具有一定的抑菌活性，可成为治疗细菌感染的候选制剂，为RhD功能和应用的研究奠定实

验基础。

关键词：镰形扇头蜱；防御素；抑菌活性

中图分类号：S855.9文献标识码：A文章编号：1008-0589（2024）10-1086-06

Prokaryoticexpressionandantimicrobialactivityofdefensinin

Rhipicephalushaemaphysaloides

CUIPu-fan,ZHANGYong-ying,SONGDeng-kuo,SHIYu-xiang,ZHONGCui-hong,

QUANTao-fen,LIShu-de,WANGFang-fang*

*Correspondingauthor

收稿日期：2024-03-06

基金项目：河北省自然科学基金（C2020402007）

作者简介：崔濮凡（1998-），男，河南开封人，硕士研究生，主要