猪氨基肽酶N受体结合区Fc融合表达及其病毒结合活性分析.pdfVIP

中国兽医杂志2025，61（9）：44-52

ChineseJournalofVeterinaryMedicine

DOI：10.20157/j.cnki.zgsyzz.2025.09.006

猪氨基肽酶N受体结合区Fc融合表达及其

病毒结合活性分析

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郭宏伟，刘妍，赵绪永，龚婷，马辉，刘薇，郑鸣

（1.河南牧业经济学院食品与生物工程学院，河南郑州450046；2.河南农业大学生命科学学院，河南郑州450046）

摘要：为了探究猪氨基肽酶N（pAPN）病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪流行性腹泻病毒

（PEDV）的结合活性，本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应（SOE-PCR）技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合，构建

酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN-Fc进行融合表达，在分子和细胞水平对比分析5个Fc融合蛋白与PEDV和TGEV结合能

力及对病毒核衣壳蛋白（N）基因mRNA转录和复制的影响，筛选潜在病毒结合受体功能关键区。结果显示，pAPN-Fc、

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pAPN-Fc、pAPN-Fc、pAPN-Fc和pAPN-Fc共5个融合片段均可在毕赤酵母X33中高效分泌表达，并可与pAPN兔多克隆抗

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体特异性结合。PEDV和TGEV结合活性酶联免疫吸附试验（ELISA）分析结果显示，pAPN-Fc、pAPN-Fc、pAPN-Fc、pAPN-

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Fc融合蛋白具有不同程度的PEDV和TGEV结合活性，且同种融合蛋白与TGEV的结合能力高于PEDV，其中pAPN（574~

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678aa）和pAPN（669~773aa）区域与病毒的结合能力较强。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）和免疫荧光共

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聚焦试验结果显示，融合蛋白pAPN和pAPN-Fc抑制PEDV和TGEVN基因mRNA转录和复制的能力较强。结果表明，

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pAPN胞外区域574~773aa可同时结合PEDV和TGEV，并能抑制病毒N基因mRNA转录和复制能力，pAPN574~773aa可能是

PEDV和TGEV结合受体的共同关键区域。本试验结果可为PEDV和TGEV的感染机制研究及抗病毒药物设计提供理论依据。

关键词：猪氨基肽酶N；肠道冠状病毒；Fc融合表达；病毒结合活性

中图分类号：S852.4文献标志码：A文章编号：0529-6005（2025