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分析与检测

DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2016.06.051

脂肪酶活力检测方法分析

□李锦才钟响马泽雄深圳市计量质量检测研究院

检测脂肪酶活力有很多方法，也

采取了大量的底物，一般都是利用不

同的目标决定最佳的底物和方法。本

文紧密围绕脂肪酶活力检测这一内容，

认真分析了所采取的各种方法，以期

获得最科学的检测脂肪酶活力的方法。

检测使用的材料和设备

扩张青霉菌脂肪酶、橄榄油、三

丁酸甘油酯、三油酸甘油酯、乙酸对

硝基苯酚酯和辛酸对硝基苯酚酯、聚

乙烯醇等。

具体采用的设备有恒温水浴摇床、

高速捣碎机、超声发声仪器、滴定电

极及光度计。

检测方法比较

抽提酶的具体方法

准备检测所需数量的酶粉经过甘

氨酸缓冲液实施溶解，使用玻璃棒实

施研碎，在低温环境下静止放置，将

上清液全部放到容量瓶中，可以把一

▲制备乳化液定的功率下严格实施超声乳化处理，在

定量的缓冲液与沉淀部分混合，如此

第一次制作乳化液选择高速捣碎对底物乳化温度控制时可以考虑使用水

反复实施冲洗，直至在容量瓶中放置

机。将4%PVA溶液100mL和底物混合，

浴，在冰箱中储存乳化液，再一次应用

所有的上清液，同时实行定容，摇晃

可以在冰箱中静置5~10℃保持1~2h，

时需要重新实施乳化。

均匀准备接下来使用。

随后向捣碎机转移，这样操作9min3

检测脂肪酶活力的方法

制备底物乳化液

次，乳化液可以保存在冰箱中，在之▲抽提正己烷方法

▲聚乙烯醇溶液

后的每一次使用时重新实施乳化。在甘氨酸缓冲液中放置1mL橄榄

称取40g聚乙烯醇，添加800

第二可以选择乳化液初步选择超油，添加规定数量的酶液在37℃的情况

mL，0.04mol/LpH9.4的甘氨酸缓冲液，

声波制作方式，充分混合4%PVA溶液

下反应10min，利用乙醇-丙酮终止反

70~80℃溶解，保持1h温度之后进行

100mL和底物。将冰箱设置为5~10℃

应，混合10mL水饱和正己烷抽取产生

冷却处理，视情况进行过滤，定容到

静止放置1~2h，在底部溶液中放置超

脂肪酸，将上层2.5mL干燥的酚酞放置

100mL。

声发生器变幅杆，通过间歇方式，在规在锥形瓶中并且和乙醇溶液定形产生脂

Feb2016CHINAFOODSAFETY91

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科技

T分析与检测

肪酸。当发生上述反应时，认真定位每并非天然脂肪酶的底物，一般也并不适通过搅碎机搅拌的效果。此外，乳化

分钟催化形成的脂肪酸的酶量单位。合应用到脂肪酶活力检测过程中，此