超氧化物歧化酶生产.pptxVIP

项目二：超氧化物歧化酶（）的生产

;一.的概况;;3的理化性质;3.3稳定性及影响因素：

（1）、热、蛋白酶的影响：在5.3～9.6间催化性能良好，在4.5～11间能稳定存在。3.6时，中95%的要脱落，在12.2时，的构象会发生不可逆的转变而使酶失活。

（2）对热的稳定性及溶液中离子强度有关。当离子强度很低时,即使加热到95℃,其活性损失也很少其他因素：活性受饮料的色泽、成分、酸碱度、乙醇含量等多种因素的影响，只有在无色、近中性、无乙醇饮料中活性较稳定。另外还发现有机溶剂和对的活性具抑制作用。;4的作用;二的运用;2.添加剂

国外不少高级化妆品都添加，国内也有数家工厂或公司在开发和生产化妆品，如大宝密，康妮、康舒达霜剂等。作为化妆品添加剂主要有3个优点：

（1）有明显的防晒效果

（2）可防皮肤衰老，阻止紫褐质（老年斑）的形成

（3）有明显的抗炎效果，对防治皮肤病有一定效果。

国外把作为食品添加剂的例子是加在口香糖和饮料中。我国贵州农学院已开发出刺梨饮料。及修饰过的还可作为外用药膏、眼药及牙膏等的添加剂。;3.生化试剂

国外已有数家公司如公司等出售试剂，国内也有厂家批量生产试剂，如中科院上海生化所东风试剂厂、南京建成生物工程研究所等。此外，有可能作为某些疾病的探针，如郭彦等人认为脑瘤组织线粒体降低是转化细胞的可靠生化指标之一，并可作为评估脑瘤分化程度的参考。;;三的生产;提取酶;操作步骤：

整个操作过程在0到5℃条件下进行。;（2）去除杂蛋白上清液中加入0.25倍体积的氯仿-乙醇混合液搅拌15，6000离心15，弃去沉淀，得到的上清液即为粗酶液。

（3）酶的沉淀分离粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15，6000离心15，得到酶沉淀。;（4）将沉淀溶入7.8，0.05的磷酸缓冲液5中，然后6000离心15，放弃沉淀，取上清液，用凝胶200进行纯化，然后超滤浓缩。

（5）用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量

（6）将浓缩冷冻干燥后即得成品。;四、酶的检验;所需溶液的配制：;2、酶活性的测定：

（1）连苯三酚自氧化速率的测定

在10试管中加入值为8.30的502424缓冲溶液4.50，在25±0.5℃的恒温水浴中保温10，然后加入在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚溶液（空白管用10代替），迅速摇匀倒入1比色皿中，以空白管为参比，在325下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3，调节连苯三酚溶液用量，将其自氧化速率控制在0.070（±0.002）。经实验测得连苯三酚溶液的用量为6μ1。;（2）样品活性测定

在10试管中加入为8.30的4.550K2424缓冲溶液和一定体积的样液，在25±0.5℃的恒温水浴中保温10，然后加入在25±0.5℃的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚6μ1，（空白管用10代替），迅速摇匀倒入1比色皿中，以空白管为参比，在325下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3，调节样液体积，使样液中连苯三酚的氧化速度控制在0.035（±0.002），记录此时样液体积。;五使用及生产时的注意事项;谢谢大家！