固相萃取技术应用于血浆中儿茶酚胺及其代谢物的提取分离40课.pptxVIP

固相萃取技术应用于血浆中儿茶酚胺及其代谢物的提取分离报告人：郭巧云时间：2023.7.18

目么是SPE？为什么选择SPE？SPE的操作步骤SPE的注意事项

什么是SPE？固相萃取法（Solid-PhaseExtraction，SPE）固相萃取法一般以吸附剂为固定相，当液体样品通过固定相时，保留其中某些组分，再用适当溶剂冲出杂质，然后用少量溶剂洗脱，从而达到分离、净化和洗脱的目的。

二氧化硅聚合物SPE填料类型

SPE类型反相SPE正相SPE离子交换SPE采用键合极性官能团（Si-CN、Si-NH、Si-二醇和纯硅胶）.采用类似烷基或者芳香基键合硅胶的非极性固定相.采用离子型官能团（将强或弱有机酸或碱键合于单体表面）.

SPE类型

血浆中儿茶酚胺及其代谢产物儿茶酚胺及其代谢物的极性较大、结构相近，而且在血浆中含量较低、干扰较大，传统的免疫法不能准确定量，必须采用先进的样品前处理方法和灵敏度更高、选择性更好的液相色谱串联质谱法进行定量分析。儿茶酚胺提取分离

96孔固相萃取柱氨基与柱表面的弱阳离子基团（WCX）通过静电相互作用结合SPE-WCX

高通量单柱96孔板SPE-WCX

200μLMeOH200μLH2OLoad：350μL样本预处理液Wash1:200μL水Wash2:200μLMeOHElute：100μLMeOH+2%FA氮气吹干，用40μLH2O复溶活化上样淋洗洗脱可选步骤SPE操作步骤

第一步：活化200μLMeOH200μLH2OHLB，疏水亲水微球SPE操作步骤

第二步：上样—350μL样本预处理液SPE操作步骤

第二步：上样—350μL样本预处理液设置固相压力：0.3MPa确保流速为：3ml/min选择低压（lowflow）SPE操作步骤

第三步：淋洗—加入淋洗液200μLMeOH200μLH2O目的：除去样品中杂质SPE操作步骤

第四步：洗脱—加入100ul洗脱液MeOH+2%FA打断吸附剂与儿茶酚胺之间的作用力，使儿茶酚胺随溶剂洗脱下来。注意：利用固相萃取仪控制洗脱流速SPE操作步骤

活化上样淋洗洗脱操作要定：活化是关键、控制上样与洗脱的流速SPE注意事项

质谱结果CAs6个化合物的色谱图

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