酶催化反应动力学课件.pptVIP

①非專一性不可逆抑制劑主要包括以下六大類：a) 有機磷化合物b) 有機汞、有機砷化合物：抑制含巰基的酶。c) 重金屬鹽：能使酶蛋白變性而失活。d) 烷化劑：與酶必需基團中的巰基、氨基、羧基、咪唑基和硫醚基等結合，從而抑制酶活性。e) 硫化物、氰化物和CO：這類物質能通過與酶中金屬離子形成較為穩定絡合物的形式，來抑制酶的活性。f) 青黴素（Penicillin）：青黴素可通過與糖肽轉肽酶活性部位絲氨酸羥基共價結合的方式，使糖肽轉肽酶失活，導致細菌細胞壁合成受阻，從而損害細菌生長。②專一性不可逆抑制劑可以分為Ks型和Kat型兩大類。a) Ks型不可逆抑制劑：具有與底物相類似的結構b) Kat型不可逆抑制劑：該類抑制劑不但具有與天然底物相類似的結構，而且抑制劑本身也是酶的底物，這類不可逆抑制劑的特點是專一性極高，因此也被稱為自殺性底物（suicidesubstrate）。3.3.1.2可逆的抑制作用由於抑制劑與酶以非共價鍵的形式結合而引起酶活力降低或喪失，但是能用透析、超濾等物理方法除去抑制劑而使酶復活，這種抑制作用是可逆的，我們稱之為可逆抑制(reversibleinhibition)。根據可逆抑制劑與底物的關係，我們將可逆抑制作用分為三種類型，它們分別是競爭性抑制、非競爭性抑制和反競爭性抑制。①競爭性抑制(competitiveinhibition)：是最常見的一種可逆抑制作用。抑制劑(I)與底物(S)競爭酶(E)的同一結合部位，因此抑制劑的存在直接影響底物與酶的正常結合。這是由於酶的活性部位不能同時既與底物結合又與抑制劑結合，所以在底物和抑制劑之間會產生競爭，從而形成一定的平衡關係。對於絕大多數競爭性抑制劑而言，其結構與底物結構十分類似，因此也能與酶的活性部位結合形成可逆的酶-抑制劑複合物EI，但酶-抑制劑複合物EI不能分解成產物P，導致相應的酶促反應速度下降。其抑制程度取決於底物和抑制劑的相對濃度，可以通過增加底物濃度的方法來解除這種抑制作用。這類抑制最典型的例子是丙二酸和戊二酸競爭與琥珀酸脫氫酶結合，但不能催化脫氫反應。②非競爭性抑制(noncompetitiveinhibition)：這類抑制作用的特點是底物(S)和抑制劑(I)可以同時與酶(E)結合，兩者之間不存在競爭關係。但是在酶與抑制劑結合後，還可以進一步與底物結合形成酶-底物-抑制劑複合物ESI；酶與底物結合後，也可以進一步與抑制劑結合形成酶-底物-抑制劑複合物ESI。但是這種中間的三元複合物，即酶-底物-抑制劑複合物ESI不能進一步分解產生產物，因此相應的酶促反應速度下降。由於這類抑制劑與酶活性部位以外的基團相結合，因此其結構與底物結構並無相似之處，而且不能用增加底物濃度的方法來解除這種抑制作用，故稱非競爭性抑制。這類抑制最典型的例子是亮氨酸是精氨酸酶的一種非競爭性抑制劑。還有某些重金屬離子如Ag+、Cu2+、Hg2+、Pb2+等對酶的抑制作用也屬於這一類。③反競爭性抑制(uncompetitiveinhibition)：這類抑制作用的特點是只有在酶(E)與底物(S)結合後，才能與抑制劑(I)結合，形成酶-底物-抑制劑複合物ESI，與非競爭性抑制相似，這種中間的三元複合物，即酶-底物-抑制劑複合物ESI不能進一步分解產生產物，因此相應的酶促反應速度下降。這種抑制作用在單底物反應中比較少見，而常見於多底物反應中。目前已經證明，肼類化合物對胃蛋白酶的抑制作用、氰化物對芳香硫酸酯酶的抑制作用、L-Phe和L-同型精氨酸等多種氨基酸對鹼性磷酸酶的抑制作用都屬於反競爭性抑制。圖3-3酶與底物或抑制劑結合的中間物3.3.2可逆抑制作用和不可逆抑制作用的鑒別鑒別可逆抑制作用和不可逆抑制作用，除了用透析、超濾和凝膠過濾等物理方法能否除去抑制劑來判斷外，還可採用化學動力學的方法來區分。圖3-4可逆抑制劑與不可逆抑制劑的區別（一）曲線1，無抑制劑；曲線2，不可逆抑制劑；曲線3，可逆抑制劑在測定酶活力的系統中加入一定量的抑制劑，然後測定不同酶濃度條件下的酶促反應初速度，以酶促反應初速度對酶濃度作圖。在測定酶活力的系統中不加抑制劑時，以酶促反應初速度對酶濃度作圖得到如圖3-4曲線1所示的一條通過原點的直線；當測定酶活力的系統中加入一定量的不可逆抑制劑時，由於抑制劑會使一定量的酶失活，因此只有加入的酶量大於不可逆抑制劑的量時，才表現出酶活力。以酶促反應初速度對酶濃度作圖得到如圖3-4曲線2所示的一條與曲線1平行的相交於橫坐標正側的直線，所以不可逆抑制劑的作用相當於把原點向右移動；當測定酶活力的系統中加入一定量的可逆抑制劑時，由於抑制劑的量是恒定的，因此以酶促反應初速度對酶濃度作圖得到如圖3-4曲線3所示