流式细胞术常见实验分析.pptVIP

结果分析

——Modfit软件分析第27页，共52页，星期日，2025年，2月5日图片拷贝：直接Ctrl+C第28页，共52页，星期日，2025年，2月5日结果分析

——Flowjo软件分析第29页，共52页，星期日，2025年，2月5日第30页，共52页，星期日，2025年，2月5日第31页，共52页，星期日，2025年，2月5日2.2.2S期特异性检测S期DNA合成期，S期的比例增多往往与细胞分裂的活跃程度相关。传统的PI染色可以通过DNA的倍增区分G1期与G2/M期。S期则因界限不明显，难以区分。若需要准确的统计S期的变化，需要加入S期的特异性标志，即BrdU。BrdU只在DNA合成时被掺入核酸，是指示DNA复制的金标准。因此可通过BrdU-AlexFluor?488与PI复染将S期准确的区分开来。第32页，共52页，星期日，2025年，2月5日2.2.3M期特异性检测G2期是指DNA合成后期，M期是细胞分裂期。二者在细胞周期事件中所处的时项不同，所表示的生物学意义也大不相同。准确检测M期的变化对细胞增殖、凋亡及癌症的研究相当重要。M期的检测标志是丝氨酸磷酸化组蛋白H3(pH3)。当细胞周期从G2期转换到M期时，染色质上的组蛋白H3Ser10发生磷酸化，并在有丝分裂后快速的去磷酸化。由此组蛋白H3的丝氨酸磷酸化变化将停留在G2期的细胞与M期的分裂细胞区分开来。第33页，共52页，星期日，2025年，2月5日2.3胞内活性氧水平的检测与分析DCFH-DA单染法DCFH-DADCFHROSDCFDCFH-DA进入细胞在细胞内酯酶作用下脱去二脂形成不发荧光的DCFH，当细胞内存在H2O2，O2-，OH-等ROS时被氧化成发绿色荧光的DCF。第34页，共52页，星期日，2025年，2月5日注意事项：第35页，共52页，星期日，2025年，2月5日（1）阴性细胞群（峰）和阳性细胞群（峰）分群明显结果分析

——数据分析中几种常见图形及分析原则分析原则：根据阴性对照界定阴性置信区；允许阴性对照非特异性荧光信号（假阳性率）一般小于1%~5%；可记录阳性细胞百分率或平均荧光强度。第36页，共52页，星期日，2025年，2月5日（2）样本管与阴性对照管峰形重叠样本管峰形左侧右移，右侧有肩峰，弱阳性的样本常出现此类图形。分析原则：根据阴性对照界定阴性置信区，阴性置信区应设在两曲线分离处；可记录阳性细胞百分率（近似值）或平均荧光强度或弱阳性；允许阴性对照非特异性荧光信号（假阳性率）高些，但阳性细胞百分率（近似值）应减去假阳性率。第37页，共52页，星期日，2025年，2月5日*****流式细胞术常见实验分析第1页，共52页，星期日，2025年，2月5日1.Guavaeasycyte8HT操作流程

2.四种常见流式细胞术细胞凋亡的检测与分析DNA含量检测与细胞周期分析胞内活性氧水平的检测与分析细胞表面分子的检测与分析组合实验第2页，共52页，星期日，2025年，2月5日1.Guavaeasycyte8HT操作流程

——Incyte模块1.1开机-清洗（原则：先开仪器后开软件，开机必清洗）1.2采集样本1.3分析1.4关机（原则：先关软件后关仪器，关机前必清洗）1.5日常维护第3页，共52页，星期日，2025年，2月5日1.1清洗第4页，共52页，星期日，2025年，2月5日1.2样本采集editWL第5页，共52页，星期日，2025年，2月5日第6页，共52页，星期日，2025年，2月5日第7页，共52页，星期日，2025年，2月5日1.3分析见具体实验的分析。1.4关机第8页，共52页，星期日，2025年，2月5日1.5日常维护保持空气干燥，会使激光器的使用寿命长一些。桌面不要有震动，以免光路发生偏移。上机前检查废液瓶是否已满，若已满或将满请倒掉，用超纯水冲洗两遍，放回原位；洗涤液瓶若已空或将空请补满（ICF：ddH2O=1：4）。实验台面保持整洁，废物缸请及时倒掉。自己的东西实验后请收走，流式专用的物品请不要带走。做完请记得登记。每周在周一进行一