分子生物学：DNA的复制.pptVIP

第二章染色体与DNA遗传物质的分子结构和性质基因组和染色体DNA的复制DNA损伤与修复重组和转座DNA的复制第一节 半保留复制的验证半保留模型(semioconservetivemodel)全保留复制模型(conservetivemodel)分散模型(Dispersivemodel)。半保留复制的验证实验一、Meselson-Stahl实验(1958)半保留复制冈崎实验中的假象E.colidUTPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。尿嘧啶N-糖苷酶（uracilN-glycosylase），它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点（apurinicorapyrimidinic，AP），再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。在dut-突变体（dUTPase缺失）中冈崎片段比在dut+中为短。这是因为U掺入机会增加；在ung-（尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突变体中，新合成的DNA约有一半由片段组成。因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不会切除U的糖苷链，也就不会出现AP位点，所以碱沉淀时不易断裂，从而保持了半不连续的原貌。在dut-,ung-双突变体中，结果和实验（2）相同，更进一步证实了此推测。二、如何打开超螺旋？引物RNA作为引物(primer)RNA引物的大小原核生物:通常为50～100个核苷酸真核生物:约为10个核苷酸RNA引物的顺序与其模板DNA的碱基顺序相配对四、复制起始点、复制子、复制方向DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。细菌的OriC结构特点：串联重复序列(tandemrepeat):A-T回文结构(palindrome)E.colioriC复制起始区的结构特点是：富含A－T，这可能和双链易于解开起始复制有关；含有多个回文结构（9－14个GATC）8个GATC较保守,GATC中的“A”已甲基化;具有4个反向重复顺序，作为蛋白结合位点；此顺序的右侧毗邻区域有两个起动子，其可能的作用是：①转录产生引物；②产生复制必要的蛋白；③产生调节功能的RNA；④起转录激活作用。细菌(或质粒)复制原点的什么特征保证了它在每一循环只起始复制一次呢？是起始发生了一些改变，且这些改变在复制原点作标记，所以已复制的复制原点与未复制的复制原点能够加以区别吗？用于这一目的的一些序列包含在复制原点。OriC包含11个拷贝的它是甲基化的靶序列，在腺嘌呤的N6位置被Dam甲基化酶所甲基化。四、参与DNA复制的物质3、DNA聚合酶(DDDP)以dNTP为前体催化合成DNA需要模板和引物的存在不能起始合成新的DNA链催化dNTP加到生长中的DNA链的3‘-OH末端催化DNA合成的方向是5→3DNA聚合酶的校对功能5→3外切酶活性DNA多聚酶Ⅲ的结构（3）、真核细胞的DNA聚合酶五种DNA聚合酶αDNA聚合酶δ和PCNADNA聚合酶γDNA聚合酶β、ε参与随从链的合成参与前导链的合成参与线粒体DNA的合成参与DNA的修复DNA的复制DNA复制中所需的酶和蛋白DNA解旋酶是一类解开氢键的酶，由水解ATP来供给能量。它们常常依赖于单链的存在，并能识别复制叉的单链结构又称为双螺旋去稳定蛋白（helixdestabilizingprotein）。当解旋酶将双链打开以后，单链DNA具有一种潜在的恢复原来双链的能力，重新形成氢键。而且单链本身若有反向重复也会形成发夹结构.这两种情况都会影响复制，但SSB可以解决这一问题。DNA拓扑异构酶是可以切断DNA链又能重新连接DNA的一种酶。可分为两类：I型拓扑异构酶II型拓扑异构酶DNA聚合酶不能从头合成DNA的一条链，所以需要一个引发反应来提供3`端羟基。这一反应是由引发酶所提供的。引发酶具有RNA聚合酶活性，在E.coli中是dnaG基因的产物。是DNA复制的主角。在E.coli中有三种：DNAPolI；II；III起主导作用的是DNAPolⅢ大部分的DNA聚合酶仅能合成一段较小的片段后即会与模板脱离。但前导链需要连续复制，这就需要一个机制保证DNA聚合酶能长时间与模板结合，提供这一功能的即为滑动夹钳。在DNA复制的起始过程中引入的小片段RNA是如何去除的？RNAse