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浓缩效应样品进入浓缩胶有一个堆积浓缩效应(缓冲液pH8.3)蛋白质从“－”极向“＋”极移动，从浓缩胶进入分离胶，速度变慢，堆积浓缩。缓冲液样品浓缩胶分离胶第29页，共85页，星期日，2025年，2月5日浓缩效应样品进入浓缩胶有一个堆积浓缩效应(缓冲液pH8.3)蛋白质从“－”极向“＋”极移动，从浓缩胶进入分离胶，速度变慢，堆积浓缩。缓冲液样品浓缩胶分离胶第30页，共85页，星期日，2025年，2月5日浓缩效应样品进入浓缩胶有一个堆积浓缩效应(缓冲液pH8.3)蛋白质从“－”极向“＋”极移动，从浓缩胶进入分离胶，速度变慢，堆积浓缩。缓冲液浓缩胶样品分离胶第31页，共85页，星期日，2025年，2月5日浓缩效应样品进入浓缩胶有一个堆积浓缩效应(缓冲液pH8.3)蛋白质从“－”极向“＋”极移动，从浓缩胶进入分离胶，速度变慢，堆积浓缩。缓冲液浓缩胶样品分离胶第32页，共85页，星期日，2025年，2月5日分子筛效应蛋白质样品进入分离胶后pH增大(pH8.9)，Gly－解离度增大，不存在快、慢离子之分，蛋白质样品在均一电场强度和pH条件下泳动。由于各种蛋白质分子量不同，因此质点的有效迁移率不同，形成不同区带。缓冲液浓缩胶分离胶第33页，共85页，星期日，2025年，2月5日分子筛效应分离胶的孔径小，各分子由于大小和形状不同，所受阻力不同，表现出不同的泳动速度，即分子筛作用。分子量小，形状为球形的泳动速度最快。缓冲液浓缩胶分离胶第34页，共85页，星期日，2025年，2月5日【操作方法】１、安装夹心式垂直板电泳槽1)装上贮槽和固定螺丝销钉，仰放在桌面上。2)将长、短玻璃板分别插到凵形硅橡框的凹形槽中，注意勿用手接触灌胶面的玻璃。3)将已插好玻璃板的凝胶模平放在上贮槽上，短玻璃板应面对上贮槽。4)将下贮槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上贮槽，双手对角线的方式旋紧螺丝帽。5)竖直电泳槽，在长玻璃板下端与硅胶模框交界的缝隙加入已融化的1%琼脂(糖)。其目的是封住空隙，凝固后的琼脂(糖)中应避免有气泡。第35页，共85页，星期日，2025年，2月5日1）分离胶的制备（按表3-2配制10%的分离胶）将制备的分离胶溶液，加至长、短玻璃板间的窄缝内，加胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm。用1mL注射器在凝胶表面沿短玻璃板边缘轻轻加一层重蒸水(约3–4mm)，用于隔绝空气，使胶面平整。约30-60min凝胶完全聚合，则可看到水与凝固的胶面有折射率不同的界线。将贮槽的蒸馏水倒去，用细条滤纸吸去残留的水液。2、凝胶的制备第36页，共85页，星期日，2025年，2月5日将制备的浓缩胶溶液加到长、短玻璃板的窄缝内，距短玻璃上缘0.5cm处，轻轻加入样品槽模板.在上、下贮槽中加入蒸馏水，但不能超过短玻璃板上缘。静置电泳槽，30min左右，上胶即可聚合，再放置10-20min，加入电极缓冲液，使液面没过短玻璃板约0.5cm，轻轻取出样品槽模板，即可加样。2）浓缩胶的制备（按表3-2配制3%的浓缩胶）第37页，共85页，星期日，2025年，2月5日3、蛋白质样品的处理1）标准蛋白质样品的处理低分子量标准蛋白试剂盒:兔磷酸化酶BMW=97,400

牛血清白蛋白MW=66,200

牛碳酸酐酶MW=31,000

胰蛋白酶抑制剂MW=20,100

鸡蛋清溶菌酶MW=14,400

开封后溶于200μl样品溶解液中，沸水浴中加热3-5min后上样。第38页，共85页，星期日，2025年，2月5日b)称制备样品1mg，按1mg/mL溶液比例加样品溶解液，将其转移到带塞的小离心管中，轻轻盖上盖子(不要塞紧，以免