酶联免疫在食品检测中的应用.pptVIP

第1页，共22页，星期日，2025年，2月5日1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即:酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)。第2页，共22页，星期日，2025年，2月5日ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它将酶促反应的高效率和免疫反应的高度专一性有机地结合起来，可对各种微量有机物含量进行测定。第3页，共22页，星期日，2025年，2月5日酶联免疫吸附试验

(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)用酶标记抗原或抗体检测未知抗体或抗原的方法。1.定义2.分类间接法（IndirectELISA）：将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未知抗体双抗体夹心法（SandwichELISA)：将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗检测液相中的可溶性抗原竞争法（CompetitiveELISA)：将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体检测液相中的可溶性抗原或抗体第4页，共22页，星期日，2025年，2月5日3.原理（以双抗体夹心法为例）：显色抗体待测抗原酶标抗体EE第5页，共22页，星期日，2025年，2月5日第6页，共22页，星期日，2025年，2月5日ELISA基本原理（1）利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶建立关联。（2）通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。第7页，共22页，星期日，2025年，2月5日ELISA测定中酶的作用由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定具有极高的灵敏度。第8页，共22页，星期日，2025年，2月5日ELISA技术在食品分析中的应用近年来，ELISA因其操作程序的规范化、简单化和检测的高灵敏性，在农药残留、动物违禁药物残留、有害细菌、有机物污染、生物毒素、食品添加剂和人畜共患疾病病原体的快速检测和分析等食品安全性检测领域正逐步推广应用。第9页，共22页，星期日，2025年，2月5日毒素检测真菌毒素是真菌产生的次级代谢产物，有十几种对人类危害较大，它们具有毒性强和污染频率高的特点。目前利用合成单克隆抗体的方式，几乎所有重要真菌毒素如伏马毒素、赭曲毒素、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯酮、展青霉素、黄曲霉毒素（AFT）等的ELISA检测方法均已建立。另外该方法也正在被广泛地应用于各种藻类和贝类毒素的检测。第10页，共22页，星期日，2025年，2月5日细菌污染检测目前利用ELSIA检测食品中的有害细菌数量有许多种途径，其中通过制备单克隆抗体分析食品中细菌的酶联免疫测定技术研究最多，检测结果准确可靠。ELISA法可用于检测食品中沙门氏菌、军团菌、大肠杆菌、李斯特菌及金黄色葡萄球菌等致病微生物。另外，ELISA在寄生虫的检测中也有应用，如：猪弓形虫。第11页，共22页，星期日，2025年，2月5日农药残留检测酶联免疫测定已成为许多国际权威分析机构如AOAC分析农药残留的首选方法。迄今为止，应用酶联免疫测定检测食品中的残留农药主要为除草剂、杀虫剂和杀菌剂。例如草甘膦的ELISA检出下限为0.07μg/mL，与色谱法测定的结果一致。第12页，共22页，星期日，2025年，2月5日肉类品质检测ELISA在肉类食品品质检测中的应用主要包括加热终温判定分析和掺入异种肉的检测两个方面。利用蛋白质制备抗体，可以指示蛋白质在加热过程中变化，在商业上作为快速判定分析肉品终温的一种ELISA方法。对掺入异种肉的检测，则利用单克隆抗体的酶联免疫测定法。目前在商业上，酶联免疫测定已可以检测十多种动物肉。第13页，共22页，星期日，2025年，2月5日动物食品违禁药物残留检测目前几乎所有违禁药物均已建立了ELISA检测方法，如：β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类、磺胺类和氟喹诺酮类等，尤其是盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和呋喃唑酮代谢物（AOZ）等违禁药物。第14页，共22页，星期日，2025年，2月5日例如瘦肉精（盐酸克伦特罗）酶联免疫检测法，基于抗原抗体反应进行竞争性抑制测定，不仅可作为一个定性筛选过程，也可以进一步进行定量测定。另外，宠物食品及含油食品中氟喹诺酮类药物如诺氟沙星、环丙沙星等残留也可以利用该方法检出，且满足欧盟及日本美国等地区和国家对该类药物筛选检测的要求。第15页，共22页，星期日，2025年，