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动物实验操作要点总结

一、动物实验操作准备阶段

（一）实验动物选择

1.实验动物来源需符合行业标准，确保健康、遗传背景清晰

2.根据实验目的选择合适品系，如SPF级小鼠适用于基础研究

3.需记录动物出生日期、性别、体重等基础信息（示例：体重范围±5g）

（二）实验环境准备

1.温湿度控制：维持在20-25℃、50±10%

2.空气洁净度：普通级实验动物房需达到10,000级标准

3.光照周期：12小时明暗交替，避免干扰动物生物钟

（三）实验器械消毒

1.金属器械：使用高压蒸汽灭菌（121℃，15分钟）

2.玻璃制品：需彻底清洗干净后浸泡于专用消毒液（如75%酒精）

3.一次性耗材：严格按批次检查生产日期和包装完整性

二、动物实验基本操作规范

（一）麻醉操作

1.常用麻醉药物：戊巴比妥钠（30-50mg/kg）、氯胺酮（80-100mg/kg）

2.麻醉给药途径：腹腔注射（首选）、静脉注射

3.麻醉深度判断：通过角膜反射、呼吸频率评估

（二）采样操作

1.血液采集：尾静脉采血（0.1ml/10g）、心脏采血

2.组织获取：遵循无菌原则，记录取样部位和顺序

3.样本保存：血液需抗凝处理（示例：肝素抗凝比率为1:9）

（三）给药途径操作

1.腹腔注射：固定动物呈仰卧位，进针角度30-45度

2.皮下注射：选择后腰或背部脂肪层，进针深度5-8mm

3.静脉注射：兔耳缘静脉首选，需建立静脉通道

三、实验过程质量控制

（一）观察指标记录

1.生命体征：呼吸频率、心率、体温（需每30分钟监测）

2.行为学观察：活动量、疼痛反应（使用GripStrength测试）

3.体液变化：每日记录饮水量、尿量（示例：小鼠日饮水量5ml）

（二）异常情况处理

1.呼吸抑制：立即停止给药，高流量氧气吸入

2.出血倾向：压迫止血并调整抗凝方案

3.感染迹象：局部红肿、体温39℃需紧急隔离

（三）数据采集标准

1.所有测量值需使用专业级仪器（精度±1%）

2.建立双盲记录系统，避免操作者主观影响

3.实验数据需实时备份至云端数据库

四、实验结束操作

（一）安乐死实施

1.合法安乐死方法：过量麻醉药物注射（如乙醚吸入）

2.需由两名实验人员共同确认动物失去反应

3.记录安乐死时间及执行人员

（二）标本处理

1.器官固定：福尔马林溶液（10%）浸泡24小时

2.组织病理：石蜡包埋前需控制切片厚度（4-5μm）

3.样本销毁：特殊病原体需经高压灭菌处理

（三）实验报告规范

1.必须包含实验动物档案号、操作人信息

2.数据呈现需使用图表与文字描述相结合

3.统计分析需注明检验方法（如t检验、ANOVA）

四、实验结束操作（续）

（一）安乐死实施（续）

1.合法安乐死方法具体操作规范：

(1)超速麻醉法：适用于需要保持组织完整性的实验，具体步骤为：

a.将动物置于密闭玻璃罩内

b.通过管道快速注入高浓度异氟烷（5-8%浓度）

c.观察动物抽搐停止后持续注入30分钟

d.确认动物脑死亡（无角膜反射、肌肉松弛）

(2)静脉注射法：适用于需要快速结束生命的场景，操作要点：

a.选择耳缘静脉或颈静脉，需进行局部消毒

b.缓慢匀速推注麻醉药物（示例：速眠新1号0.1ml/10g）

c.持续观察至动物呼吸停止（通常3-5分钟）

2.特殊情况处理预案：

(1)动物剧烈挣扎时的应对措施：

a.立即降低麻醉药物浓度

b.使用肌肉松弛剂辅助（如筒箭毒碱0.5mg/kg）

c.由第二人协助固定头部

(2)麻醉过深时的急救方法：

a.立即停止给药

b.进行人工呼吸（每分钟30-40次）

c.使用纳洛酮（阿片类药物拮抗剂）解毒（0.1mg/kg）

3.实验记录补充要求：

(1)必须记录安乐死实施时间（精确到分钟）

(2)记录最终使用的药物名称、剂量和浓度

(3)对安乐死方法的有效性进行评估（如抽搐持续时间）

（二）标本处理（续）

1.器官固定优化方案：

(1)根据不同组织特性选择固定液：

a.脑组织：4%多聚甲醛（pH7.4）

b.心脏血管：含0.1M蔗糖的4%多聚甲醛

c.骨骼组织：Bouins液（福尔马林-铬酸混合液）

(2)固定时间控制标准：

a.软组织：24-48小时（根据组织大小调整）

b.硬组织：48-72小时（需更换固定液）

(3)固定液配制注意事项：

a.液体温度需控制在4℃±2℃

b.pH值使用精密pH计校准（误差0.1）

2.组织病理制备细化流程：

(1)石蜡包埋操作步骤：

a.组织脱水（70%-95%酒精梯度，每梯度12小时）

b.透明（无水乙醇与二甲苯混合液，24小时）

c.浸蜡（不同浓度石蜡交替处理，最终使用58℃石蜡）