实验6-维生素C的提取及定量测定(医学课件).pptVIP

实验八维生素C的提取及定量测定

一、实验目的1、学习维生素C的重要性质。2、掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。3、熟悉、掌握微量定量法的基本操作技术。

结构与性质维生素C/L-抗坏血酸(ascorbicacid)多羟基，内酯；酸性；易被氧化：中、碱性，热，光，重金属破坏

L-抗坏血酸脱氢抗坏血酸*若脱氢维生素C进一步氧化，则失去活性

富含维生素C量高的食物（毫克/100克食物)酸枣——830-1170

猕猴桃——568

枣——549

辣椒——185

山楂——89

柿子椒——89

菜花——88

金花菜——85

苦瓜——84

雪里红——83

豌豆苗——53

油菜——51

橙——49

柚——41

柠檬——40

柑橘——34

水萝卜——34

大白菜——19

西红柿——12芥菜头——80

青蒜——77

来源新鲜水果及蔬菜:橙类、番茄、辣椒

2,6-二氯酚靛酚——氧化还原指示剂

维生素C属于水溶性，具有很强的还原性，易被氧化成脱氢维生素C维生素C具有很强的还原性，在中性和微酸性环境中，能将染料2，6-二氯酚靛酚（氧化型）还原成无色的（还原型）的2，6-二氯酚靛酚，同时被氧化成脱氢维生素C。当样品中的维生素C全部被氧化后，再滴入的2，6-二氯酚靛酚就不再被还原脱色而呈玫瑰色。溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点。从滴定时2，6-二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。二、实验原理

计算公式：VA为滴定样品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均mL数；VB为滴定空白对照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均mL数；S为1mL2，6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数；W为10mL样品提取液中含样品的g数。

三、器材研钵移液管10mL50ml容量瓶50ml锥形瓶微量滴定管漏斗纱布滤纸药物天平刻度吸管

三、试剂和材料绿豆芽2%草酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液标准抗坏血酸溶液

操作步骤1.提取：称取新鲜样品约20g，置于研钵中，加入15ml2%草酸溶液研磨成浆状，残渣再次研磨，一同转入50ml容量瓶中，加草酸定容。2.过滤：提取液充分混匀后，过滤。3.样品滴定：准确吸取滤液10ml于50ml的锥形瓶中，立即用标定过的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，粉红色，15秒不褪色。记录所用染料的毫升数（重复测定2～3次）。

4.空白滴定：准确吸取2%的草酸10ml于50ml的锥形瓶中，立即用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，粉红色，15秒不褪色。记录所用染料的毫升数（重复测定2～3次）。

5.标准液滴定准确吸取标准抗坏血酸溶液5mL，置于50mL锥形瓶中，用微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸（取5mL2%草酸作空白对照，按同样方法滴定）。6.计算

计算公式：VA为滴定样品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均mL数；VB为滴定空白对照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均mL数；S为1mL2，6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数；W为10mL样品提取液中含样品的g数。

注意事项(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇消泡。(2)整个实验操作过程要迅速，防止样品中还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min，滴定所用染料不应小于1mL或大于4mL。如果样品含维生素C太高或太低，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。(3)提取的浆状物如不易过滤，也可进行离心，留取上清液进行滴定。

思考题为什么维生素C标准溶液要用新鲜配制的？为准确测得维生素C的含量，实验时要注意那些操作步骤？

需要配置的药品0.1%2，6-二氯酚靛酚：2L将0.25g2，6-二氯酚靛酚溶于300mL含有0.21g碳酸氢钠的热水中（加热），冷却后加水稀释至1000mL，贮于棕色瓶中冷藏(4℃)，约可保存一周。

需要配置的药品2%草酸溶液配置3L标准抗坏血酸溶液：200ml标准抗坏血酸溶液(1mg/mL)：准确称取100mg（0.1g）纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用），溶于2%草酸溶液并稀释至100mL，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。

过滤

滴定

四、操作要点公用试剂的使用、玻璃器皿清洁、定量、定时

移液管使用

谢谢大家！ThankYou！