2.2 动物细胞融合技术与单克隆克隆抗体（第2课时）课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

植物体细胞杂交植物细胞融合植物组织培养温故而知新:植物体细胞杂交(P38图2-4）

运用植物体细胞杂交技术，可以跨越不同种植物之间生殖隔离的屏障，实现远缘杂交育种，培育出新的作物类型。那么，有没有技术能让不同种动物的体细胞进行杂交，培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢？有，可以利用动物细胞融合技术培养。

二、动物细胞融合技术与单克隆抗体（一）动物细胞融合技术：P481.概念：2.原理：3.融合方法：4.意义：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。细胞膜的流动性PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。（化学法、物理法、生物法）突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段，特别是杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。与诱导植物原生质体融合的方法一样：P37动物细胞融合特有杂交细胞：具有原来两个或多个细胞的遗传信息

相关信息：P48灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，并不破坏它们的抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。动物细胞融合实质及完成的标志：细胞核的融合

二、动物细胞融合技术与单克隆抗体（二）单克隆抗体及其应用1.早期获得抗体的方法：P49向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。选择性必修1P68抗原不纯抗体不纯缺点：产量低、纯度低，特异性差。为解决这一难题，科学家进行了多年的研究和探索。

2.科学家发现哺乳动物感染病原体后，体内会形成相应的B淋巴细胞，这些细胞能分泌抗体，抗体识别并特异性结合病原体，从而抑制病原体的增殖等。动物体内产生的特异性抗体种类超过百万种，但每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。因此，要想获得大量单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。遗憾的是，在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的。如何解决这一难题？

1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒在前人工作的基础上，充分发挥想象力，设计了一个极富创造性的实验方案：P49一种B淋巴细胞（只产生一种特定抗体）能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞融合杂交瘤细胞产生足够数量的特定抗体米尔斯坦科勒由于发明了单克隆抗体的制备技术，米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖大量增殖单克隆抗体单克隆抗体：由单个B淋巴细胞经过克隆（无限增殖），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。

注射特定的抗原多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合（1）未融合的细胞（2）多种杂交细胞：①B-B细胞、②瘤-瘤细胞、③杂交瘤细胞动物细胞融合（二）单克隆抗体及其应用3.制备单克隆抗体的过程：P48~49图2-16*不是为了得到抗体！第一次筛选：获得杂交瘤细胞原理细胞膜的流动性

（1）未融合的细胞（2）多种杂交细胞（3种）杂交瘤细胞抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（能产生特定抗体的杂交瘤细胞）用特定的选择培养基第一次筛选克隆化培养、抗体检测第二次筛选（可进行多次）注射到小鼠腹腔内体外培养获取单克隆抗体从小鼠腹水中从细胞培养液中动物细胞培养?杂交瘤细胞的特点:第二次筛选：获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞优点：能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备原理细胞增殖

（二）单克隆抗体及其应用3.制备单克隆抗体的过程：动物细胞融合（原理：细胞膜的流动性）*不是为了得到抗体！第一次筛选：获得杂交瘤细胞动物细胞培养（原理：细胞增殖）第二次筛选：获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞杂交瘤细胞的特点:优点：能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备

未融合的亲本细胞两两融合的细胞融合的具有同种核的细胞融合的杂交瘤细胞B-B细胞瘤-瘤细胞只考虑两两融合，诱导融合之后，一定会得到所需杂交瘤细胞吗？思考1（二）单克隆抗体及其应用3.制备单克隆抗体的过程:P48~49图2-16不一定

第二次筛选的目的是获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞,那么如何筛选？思考2用96孔板培养和筛选杂交瘤细胞，（每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞），进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选就可获得。思考3选择抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞，抗体检测原理是什么？抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定）

阳性孔在单克隆抗体制备过