2026版《课堂新坐标》高三生物学一轮复习不定项版80选择性必修3第九单元素养加强课9PCR技术与电泳相关问题.pptxVIP

;1．PCR循环图示及规律;2．PCR中的数量关系;3．利用RT-PCR技术进行RNA病毒的核酸检测

(1)RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术)

①先从样本中提取RNA，RNA中可能有某病毒的RNA，同时也存在很多采样患者的组织和存在于采样部位的微生物的RNA。

②先通过逆转录酶将样本的RNA逆转录为cDNA。因为病毒中的核酸为RNA，而RNA极易降解，为了防止检测的物质在检测过程中降解，把它转换为更稳定的DNA。;③检测扩增出的PCR产物，即DNA片段。扩增的病毒DNA片段能够发出荧光而被仪器检测到。这些扩增出的供检测的产物的多少，很大程度上取决于样本中目标RNA量的多少。而目标RNA量的多少又与样本中病毒的多少相关。;(2)荧光探针法(TaqMan技术)是临床检测中最常用的检测方法。PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针是一个寡核苷酸，5′端标记一个荧光报告基团(Reporter，R)，3′端标记一个淬灭基团(Quencher，Q)。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，以至于无法检测到荧光信号；而当PCR扩增时(在延伸阶段)，探针会被TaqDNA聚合酶的5′→3′外切酶活性酶切降解，使报告基团和淬灭基团分离，报告基团发射的荧光不会再被吸收，从而可以在荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一条DNA，就形成一个荧光分子，PCR产物的形成与荧光分子的形成完全同步，PCR产物越多，荧光信号累积的越多，荧光强度越大。如图所示：;荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。Ct40或无Ct值判定为阴性。;4．CRISPR/Cas9结合PCR

CRISPR/Cas9系统是一种革命性的基因组编辑技术，其原理是由一条单链向导RNA(SgRNA)引导限制性内切核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割(如图)。CRISPR复合体中的SgRNA的主要功能是与靶向基因(目的基因)上特定碱基序列互补，从而定向引导Cas9蛋白与靶向基因结合，并在特定位点切割DNA。;通过扩增特定的基因片段，并将其插入目标基因中，可以实现对基因的敲除或敲入，为研究基因功能提供有力手段。将CRISPR/Cas9系统与PCR技术结合，可以实现对特定基因的高效编辑和检测。;1．(2024·河北部分高中模拟)现如今随着技术的不断发展，人们发明了多种PCR技术的衍生版本，如重叠延伸PCR、等位基因特异PCR、热不对称性PCR、荧光定量PCR、锅柄式PCR等。这些新技术在不同层面对传统PCR技术进行了较完善合理的改进。下列有关PCR的叙述正确的是()

A．已知重叠延伸PCR可将两个或多个DNA片段连接起来，因此可用于较长DNA分子的人工合成

B．已知等位基因特异PCR可鉴定出两个基因中单核苷酸的差异，因此可用于病毒的检测与分析;C．已知热不对称性PCR可通过调节退火温度产生多种产物，因此操作时对温度的要求低于常规PCR

D．已知荧光定量PCR可将扩增的结果表现为便于观察的荧光信号，因此可用于亲子鉴定;A[重叠延伸PCR可将两个或多个短DNA连接成一个长DNA，可以将人工合成的短DNA合成为目标长DNA，A正确；等位基因特异PCR可鉴定出两个基因中单核苷酸的差异，可用于亲子鉴定以及遗传病的筛查，无法检测是否存在某种病毒，B错误；热不对称性PCR需对温度进行精细控制，对温度的要求高于常规PCR，C错误；荧光定量PCR可将扩增的结果表现为便于观察的荧光信号，可用于某些病毒的检测，无法判断两份DNA间的细微差别，因此无法用于亲子鉴定，D错误。];2．(不定项)(2024·湖南岳阳模拟)实时荧光RT-PCR用于RNA病毒的核酸检测，其原理是在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光，如图所示。下列有关叙述正确的有();A．与细胞内DNA复制相比，该技术用的DNA聚合酶最适温度较高

B．通过温度变化的控制为变性、复性和延伸等过程提供能量

C．该过程中消耗引物的量与发出的荧光强度之间呈负相关

D．与抗体检测相比，核酸检测能更早发现患者并及时治疗;AD[实时荧光RT-PCR过程温度要高于体温，A正确；温度不能为变性、复性和延伸等过程提供能量，B错误；复性过程中探针和引物一起与模板结合，故消耗引物的量与发出的荧光强度之间呈正相关，C错误；从感染病毒到抗体产生，需要一定的免疫时间，所以与抗体检测相比，核酸检测能更早发现患者并及时治疗，D正确。];3．(2024·全国新课标卷)某研究小组将纤维素酶基因(N)插入某种细菌(B1)的基因组中，构建高效降