酶与细胞固定化课件.pptVIP

第三節微生物、植物和動物細胞固定化三、固定化植物細胞植物是各種天然色素、香精、藥物和酶的重要資源。20世紀80年代發展起來的植物細胞培養和發酵技術，為上述這些天然產物的工業化生產開闢了新途徑，呈現出美好的前景。然而由於植物細胞體積較大，對剪切力較敏感，加上生長週期長，容易聚集成團等原因，使植物細胞懸浮培養及發酵生產中存在穩定性較差，產率不高等問題。人們在不斷探索解決這些問題的途徑。其中植物細胞固定化技術所顯示的優點對植物游離細胞的不足之處起到彌補作用。第三節微生物、植物和動物細胞固定化固定化植物細胞具有下列特點：(1)植物細胞經固定化後，由於有載體的保護作用，可減輕剪切力和其他外界因素對植物細胞的影響，提高植物細胞的存活率和穩定性。(2)細胞經固定化後，被束縛在一定的空間範圍內進行生命活動，不容易聚集成團。(3)固定化植物細胞發酵可以簡便地在不同的培養階段更換不同的培養液，即首先在生長培養基中生長增殖，在達到一定的細胞密度後，改換成發酵培養基，以利於生產各種所需的次級代謝物。(4)固定化植物細胞可反復使用或連續使用較長的一段時間，大大縮短生產週期，提高產率。(5)固定化植物細胞易於與培養液分離，利於產品的分離純化，提高產品品質。第三節微生物、植物和動物細胞固定化植物細胞固定化的方法主要有吸附法和包埋法兩種。吸附法是將植物細胞吸附在泡沫塑料的孔洞或裂縫內，或者將植物細胞吸附在中空纖維的外壁上。例如：將洗淨、滅菌後的泡沫塑料粒放進辣椒細胞的培養液中，振盪培養一段時間，辣椒細胞則吸附在泡沫塑料的孔洞內，並在其中進行生長繁殖和新陳代謝。採用中空纖維為載體進行植物細胞固定化是具有美好前景的方法。此法是把植物細胞定置在中空纖維的外壁與外殼容器的內壁之間，細胞吸附在中空纖維的外壁，培養液及氧氣在中空纖維的管內流動，各種營養成分及溶解氧透過中空纖維的半透膜管壁傳遞給管外壁的細胞，植物細胞的代謝產物又通過中空纖維膜分佈到管內培養液中，隨培養液流出。這種方法近似於植物體內物質的傳遞與交換形式，有利於細胞生長和新陳代謝的進行。中空纖維作為固定化載體的缺點是有時纖維管會阻塞而影響物質傳遞，而且中空纖維成本較高，難以大規模生產應用。利用中空纖維固定化植物細胞的研究發展很快。據報導，利用中空纖維固定化的豌豆細胞和胡蘿蔔細胞進行生產多酚化合物的研究，取得顯著效果，可連續使用一個多月。第三節微生物、植物和動物細胞固定化包埋法是將植物細胞包埋在瓊脂、角叉菜膠、海藻酸鈣凝膠、聚丙烯醯胺凝膠、明膠等多孔凝膠之中。包理方法與微生物細胞包埋時基本相同。此法已在植物細胞固定化，以及發酵生產次級代謝物方面廣泛採用。1979年，Brodelius等人首次用海藻酸鈣凝膠包埋法制備固定化長春花細胞、毛地黃細胞和海巴戟細胞，開創了植物細胞固定化的研究。此後，此技術迅速發展，已有不少成功的報導。第二節酶和菌體固定化5．熱處理法將含酶細胞在一定溫度下加熱處理一段時間，使酶固定在菌體內，而製備得到固定化菌體。熱處理法只適用於那些熱穩定性較好的酶的固定化，在加熱處理時，要嚴格控制好加熱溫度和時間，以免引起酶的變性失活。例如，將培養好的含葡萄糖異構酶的鏈黴菌細胞在60～65℃的溫度下處理15min，葡萄糖異構酶全部同定在菌體內。熱處理法也可與交聯法或其他固定化法聯合使用，進行雙重固定化。第二節酶和菌體固定化二、固定化酶的性質將酶或含酶菌體固定化製成固定化酶或固定化菌體以後，由於受到載體等的影響，酶的特性可能會有些變化。在固定化酶的使用過程中必需瞭解並對操作條件加以適當的調整。現將固定化酶的主要特性介紹如下：1.穩定性固定化酶的穩定性一般比游離酶的穩定性好。主要表現在：(1)對熱的穩定性很高，可以耐受較高的溫度。(2)保存穩定性好，可以在一定條件下保存校長的時間。(3)對蛋白酶的抵抗性增強，不易被蛋白酶水解。(4)對變性劑的耐受性提高，在尿素、有機溶劑和鹽酸胍等蛋白質變性劑的作用下，仍可保留較高的酶活力等。第二節酶和菌體固定化2.最適溫度固定化酶的最適作用溫度一般與游離酶差不多，活化能也變化不大。但有些固定化酶的最適溫度與游離酶比較會有較明顯的變化。例如：用重氮法制備的固定化胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶，其作用的最適溫度比游離酶高5～10℃；以共價結合法固定化的色氨酸酶，其最適溫度比游離酶高5～15℃。同