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;;01;组织取样方法(穿刺/手术);样本固定(10%中性缓冲甲醛);;02;组织脱水与浸蜡流程;石蜡包埋技术要点;切片厚度(4微米)与玻片贴附;03;采用高压锅或专用抗原修复仪,将组织切片置于pH6.0的柠檬酸缓冲液中,通过高温高压(约120℃)作用使抗原表位充分暴露,适用于稳定性较差的抗原如ER、PR等。操作需严格控制压力与时间,避免过度修复导致组织脱片或抗原破坏。;酶修复(蛋白酶K);采用与二抗同源的5%-10%正常血清(如山羊血清)封闭30分钟,可有效减少Fc受体介导的非特异性结合。针对高背景染色的标本,可添加0.1%TritonX-100增强封闭效果。;04;抗体特异性验证;次级抗体(二抗)应用;;05;;显微镜下染色评估;边缘效应纠正措施;06;;操作人员需穿戴一次性无菌手套、N95口罩及护目镜,接触高危试剂时加穿防渗透隔离衣。样本处理区禁止佩戴首饰或裸露皮肤,避免气溶胶接触。;标准化操作记录;THANKS
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