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发酵工程实验复习题详解

发酵工程实验是连接理论知识与生产实践的重要桥梁，其核心在于理解微生物的生长规律、代谢调控机制以及发酵过程中各项参数的优化控制。扎实掌握实验原理、操作技能及结果分析方法，对于深入领会发酵工程的精髓至关重要。以下将结合实验教学中的常见重点与难点，对复习题进行详细解析，以期帮助同学们巩固知识，提升实验操作与问题解决能力。

一、培养基的制备与灭菌技术

培养基是微生物生长繁殖和合成目标产物的营养基础，其制备的科学性与灭菌的彻底性直接关系到实验的成败。

典型例题1：简述配制液体培养基的一般步骤，并说明在配制过程中应注意哪些关键问题？

详解：液体培养基的配制通常遵循以下步骤：

1.称量：根据培养基配方，准确称取各种营养成分。注意：有些成分可能具有吸湿性或易挥发，应快速准确称量；对于微量成分，可先配成高浓度母液再进行稀释添加，以保证准确性。

2.溶解：将称量好的成分依次加入到适量的蒸馏水中，搅拌至完全溶解。对于难溶性物质，可适当加热促进溶解，但需注意温度对热敏感物质的影响。

3.调节pH：使用盐酸或氢氧化钠溶液，在pH计监测下将培养基的pH值调至所需范围。注意：有些培养基在灭菌后pH会发生变化，需根据经验适当预调。

4.定容：将调节好pH的培养基转移至容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。

5.分装：根据实验需要，将培养基分装到合适的容器中，如三角瓶、试管等。分装量不宜过多，特别是需要摇床培养的三角瓶，一般不超过其容积的1/3，以保证通气效果。

6.加塞与包扎：分装后，瓶口需塞上棉塞或硅胶塞，并进行适当包扎（如用牛皮纸或报纸），以防灭菌过程中冷凝水浸湿棉塞及防止灭菌后再次污染。

关键注意事项：

*水质：一般使用蒸馏水或去离子水，避免自来水中的矿物质或杂质对微生物生长产生干扰。

*准确称量：尤其是碳氮源等主要成分，其比例直接影响微生物的生长和代谢。

*pH调节：不同微生物对pH的要求不同，必须严格控制。调节时应缓慢滴加酸碱液，边加边搅拌。

*分装规范：避免培养基沾污瓶口和外壁，以免灭菌后造成污染。

典型例题2：培养基灭菌的常用方法有哪些？试述高压蒸汽灭菌法的原理、操作步骤及注意事项。

详解：培养基灭菌常用方法包括：高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法、过滤除菌法、紫外线灭菌法、化学药剂灭菌法等。其中，高压蒸汽灭菌法是实验室和工业上应用最广泛、效果最可靠的湿热灭菌方法。

*原理：利用饱和水蒸气在高压下所产生的高温（通常121°C，1.05kg/cm2或15磅/英寸2压力下）使微生物体内的蛋白质、核酸等生物大分子变性凝固，从而达到杀灭包括芽孢在内的所有微生物的目的。湿热灭菌穿透力强，灭菌效果优于干热。

*操作步骤：

1.加水：向灭菌锅内加入适量蒸馏水，水位需淹没加热管。

2.装锅：将分装好的培养基放入灭菌锅内，注意不要装得太满，要留有蒸汽流通的空间。灭菌物品之间应留有间隙。

3.排气：关闭灭菌锅盖，旋紧螺丝，开始加热。当压力上升至0.05MPa左右时，打开排气阀，彻底排出锅内冷空气，直至有大量蒸汽喷出后再关闭排气阀。这一步是保证灭菌温度的关键。

4.升压升温：继续加热，使锅内压力和温度逐渐升至所需值（通常121°C，1.05kg/cm2）。

5.保温保压：达到规定压力和温度后，开始计时，维持一定时间（根据培养基性质和体积确定，一般为15-30分钟）。

6.降压排气：灭菌时间结束后，关闭热源，让灭菌锅自然冷却。当压力降至0MPa时，方可缓慢打开排气阀，排出剩余蒸汽，然后打开锅盖。

7.取出灭菌物：取出灭菌后的培养基，摆放在平整处冷却，观察灭菌效果（如棉塞是否湿润、培养基是否澄清或凝固良好）。

*注意事项：

*灭菌前必须彻底排除冷空气，否则锅内温度达不到规定值，导致灭菌不彻底。

*灭菌锅内物品放置不宜过挤，确保蒸汽循环畅通。

*严格控制灭菌温度和时间，过高过长可能破坏培养基营养成分，过低过短则灭菌不彻底。

*灭菌结束后，必须待压力降至零时方可开盖，以防培养基暴沸冲出或造成人员烫伤。

*对某些热敏感或易分解的成分（如维生素、某些酶类），不宜采用高压蒸汽灭菌，应选择过滤除菌等方法。

二、微生物的接种与培养技术

无菌操作是微生物实验的灵魂，接种技术则是将菌种引入培养基的关键环节，直接影响培养结果的准确性与可靠性。

典型例题3：何为无菌操作？在微生物接种过程中，如何确保无菌操作？

详解：无菌操作是指在微生物实验中，防止外界微生物污染实验材料（如培养基、菌种）和防止实验微生物污染环境及操作人员的一系列操作技术。其核心是创造一个无杂菌的环境。

确保接种过程无菌操作的要点：

1.操作环境无菌：通常在超净工作台或无菌室内进行。操作前需