G1P[7]型猪轮状病毒的分离鉴定及其全基因组分析.pdfVIP

南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2025，56（3）：932-943

ISSN2095-1191；CODENNNXAAB

DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2025.03.023

G1P［7］型猪轮状病毒的分离鉴定及其

全基因组分析

1，23222321，2，3*

王建新，马润超，周金柱，卞贤宇，朱雪蛟，李昱辰，张雪寒，李彬

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（河北农业大学动物医学院，河北保定071000；江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点

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实验室，江苏南京210014；南京农业大学动物医学院，江苏南京210095）

摘要：【目的】分离鉴定G1P［7］型猪轮状病毒（PoRV）并进行全基因组分析，为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供

理论依据。【方法】腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供，对样本进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传

染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）及PoRVPCR检测。向PCR检测

结果为阳性的样本上清液中加入胰蛋白酶，随后接种到MA104细胞进行病毒分离和纯化。通过PCR检测、电镜观察、

间接免疫荧光检测和RAN检测鉴定毒株。通过绘制病毒增殖曲线和检测病毒对MA104、Vero、IPEC-J2、

HT-29、HRT-18和Caco-2细胞的易感性探究毒株生物学特性。利用生物信息学软件分析分离毒株的11个基因与国内

外各基因型轮状病毒的同源性并构建病毒全基因组系统发育树。【结果】粪便样本PCR检测结果显示，粪便样本中仅

PoRV呈阳性。成功分离出1株PoRV，将该毒株命名为JSNJ2023，病毒在MA104细胞上能稳定增殖和传代，经3次克

隆，筛选出适合的克隆株，在第3次克隆中，选择病毒滴度最高的克隆株进行扩大培养，最终成功获得高滴度的单克隆

毒株。病毒颗粒呈明显的球形结构，具有清晰的双层衣壳特征，直径约70nm。间接免疫荧光检测结果显示，

JSNJ2023毒株能感染MA104细胞。RNA检测结果显示，JSNJ2023毒株具有A群轮状病毒特征性的11条电泳图

谱，排列方式为4∶2∶3∶2。病毒增殖曲线显示，接种病毒18h后JSNJ2023毒株在MA104细胞中的病毒滴度达峰值，

随着感染时间的延长，病毒滴度逐渐降低。JSNJ2023毒株对细胞的易感性依次为MA104、IPEC-J2、HRT-18、HT-29、

Caco2和Vero细胞。基因同源性分析与系统发育树构建结果显示，JSNJ2023毒株属于猪A群G1P［7］型轮状病毒，其

基因型为G1-P［7］-I5。【结论】成功分离获得PoRVJSNJ2023毒株，其属于A群G1P［7］型轮状病毒，基因型为G1-P

［7］-I5。JSNJ2023毒株与人、猪及牛轮状病毒存在高度同源性，其进化过程中可能受到人轮状病毒、PoRV与牛轮状

病毒的影响，发生了基因重组或交换，形成了独特的基因型（R1-C1-M1-A8-N1-T7-E1-H1）。

关键词：猪轮状病毒（PoRV）；全基因组测序；遗传进化分析；基因重组

中图分类号：S825.651文献标志码：A文章编号：2095-1191（2025）03-0932-12

Isolation，identificationandwholegenomeanalys