一株PEDV广东流行株S1基因遗传进化分析及其在昆虫细胞中的表达纯化.pdfVIP

第45卷第2期肇庆学院学报Vo1.45,No.2

2024年3月JOURNALOFZHAOQINGUNIVERSITYMar.2024

肇庆学院学报第45卷

一株PEDV广东流行株S1基因遗传进化分析及其

在昆虫细胞中的表达纯化

刘郁夫，林晓慧，谭银娟，冯美莹1121

（1.肇庆学院生命科学学院，广东肇庆526061；2.华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司，广东肇庆526238）

摘要：为了解猪流行性腹泻病毒广东流行株的S1基因流行变异情况，制备相应的诊断试剂，试验采用

RT-PCR从猪流行性腹泻疑似发病仔猪的肠道内容物中扩增获得S1基因，利用生物信息学软件构建S1基因

的遗传进化树.将S1基因克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac1，转化至DH10Bac感受态细胞中，经抗生素筛选

重组杆粒，把重组杆粒转染到昆虫细胞Sf9，盲传3代后进行间接免疫荧光试验和Westernblot鉴定.结果表明：

该猪流行性腹泻病毒广东流行株分布于GII-b分支，与国内猪流行性腹泻病毒分离株（HN-HB1-2018、HB-

HA2015）的核苷酸相似性为98.0%~98.3%，而与猪流行性腹泻病毒经典毒株CV777、DR13的核苷酸相似性仅

为89.9%~90.0%.且S1重组蛋白可在昆虫细胞Sf9中以细胞培养分泌上清的形式表达.本研究可为猪流行性腹

泻病毒的流行现状研究提供参考，以及后续猪流行性腹泻病毒诊断制品的研发提供前期基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒；S1基因；遗传进化；昆虫细胞

中图分类号：S855.3文献标志码：A文章编号：1009-8445（2024）02-0016-06

猪流行性腹泻病毒（Porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV）是单股正链RNA病毒，属于冠状病毒科α

[1]

冠状病毒属成员，基因组大小约28kb，是引起猪病毒性腹泻的重要病原.PEDV几乎可感染所有年龄段猪，

以急性肠炎、呕吐、水样腹泻和脱水为主要临床症状，7日龄以内的新生仔猪感染发病死亡率可高达100%，

[2]

给养猪业造成严重经济损失.

PEDVS蛋白由大约1383个氨基酸组成，位于病毒囊膜外层，通过弗林蛋白酶酶切位点划分成S1和S2

[3]

亚基，其中S1亚基含有大多数受体结合位点，是诱导机体产生中和抗体的重要免疫原性蛋白.PEDV的S1

基因具有较高的遗传变异性，是病毒实现免疫逃逸主要方式，临床实践中常通过对PEDVS1基因序列进行

[4-6]

测序，监测PEDV流行毒株的变异情况.

PEDV阳性病料来源于2020年12月广东省某规模化猪场的发病仔猪病料，经RT-PCR鉴定为PEDV阳

性，TGEV、PDCoV和PRoV为阴性.本研究通过RT-PCR扩增出该流行毒株的S1基因片段，对S1基因进行测

序分析，并将S1基因ORF全长克隆至pFastBac1质粒中，构建表达PEDVS1蛋白的重组杆状病毒，最后在昆

虫细胞Sf9中实现S1重组蛋白的表达纯化.本研究可为PEDV的防控和流行现状研究提供参考，并为后续研

制PEDV诊断制品提供基础.

1材料

1.1样品

PEDV阳性病料来源于2020年12月广东省某规模化猪场的发病仔猪