（人教版）高中生物学选择性必修3 生物技术与工程导学案 第3章　专项提升课　基因工程.pptxVIP

;核心目的;一、基因工程的基本工具;1．下表为常用的限制性内切核酸酶(限制酶)及其识别序列和切割位点，由此推断以下说法中，正确的是();A．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

B．限制酶切割后一定形成黏性末端

C．不同的限制酶切割DNA分子后可以形成相同的黏性末端

D．限制酶的切割位点在识别序列内部;C解析：由题图可知，由于Y＝C或T，R＝A或G，因此HindⅠ可以识别多种核苷酸序列，A错误；限制酶切割后可以形成黏性末端或平末端，B错误；不同的限制酶切割DNA分子后可以形成相同的黏性末端，如BamHⅠ和Sau3AⅠ，C正确；限制酶的切割位点也可以在识别序列的外部，如Sau3AⅠ，D错误。;2．DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶，其中4种限制性内切核酸酶的切割位点如图所示。;回答下列问题：

(1)常用的DNA连接酶有______________和________________，其中________DNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率相对较高。上图中________________________酶切割后的DNA片段具有黏性末端，上图中___________________________酶切割后的DNA片段具有平末端。

(2)DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是__________。;(3)DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征。如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能____________；质粒DNA分子上有____________，便于外源DNA插入；质粒DNA分子上有标记基因(如某种抗生素抗性基因)，利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是________________________________

______________________________________________________________________________________________________________________。;解析：(1)由题图可以看出，EcoRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ、EcoRⅤ切割后分别形成黏性末端、平末端、黏性末端和平末端，E.coliDNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率远远低于T4DNA连接酶。(2)DNA连接酶催化DNA链的5′端与另一DNA链的3′端生成磷酸二酯键。(3)复制原点是在质粒DNA上复制起始的一段序列，可以保证质粒在宿主细胞中进行自我复制。质粒上有限制酶切割位点，该位点可被限制酶切开并使外源目的基因插入其中。若??粒DNA分子上有某种抗生素抗性基因，则可以用含有该抗生素的培养基培养宿主细胞，能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞。;答案：(1)E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶T4EcoRⅠ、PstⅠSmaⅠ、EcoRⅤ(2)磷酸二酯键(3)自我复制限制酶切割位点用含有该抗生素的培养基培养宿主细胞，能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞;二、基因工程的基本操作程序;3．凝乳酶是食品生产中常用的凝结剂，

科研人员从动物体内获得了凝乳酶

mRNA，拟利用大肠杆菌通过基因工

程生产凝乳酶。据图回答下列问题：;(1)利用凝乳酶mRNA，在________酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，进一步通过PCR扩增时需要2种引物，引物的作用是______

_____________________________________________________________________。;(2)图1和图2是选用的质粒及其几种相关限制酶的识别位点，在构建基因表达载体时，最好选用的限制酶是______________________，这样选择的优点是________________________________________(答出两点)。为在凝乳酶基因两侧加上相应的酶切位点，设计引物时需在引物前添加相应酶切位点，PCR过程中至少复制________次才可以得到含所需酶切位点的凝乳酶基因。

(3)将构建的重组质粒导入大肠杆菌，需要用Ca2＋处理，使大肠杆菌处于________。;(4)将在添加了青霉素的培养基中得到的4个大肠杆菌菌落，进行进一步检测，检测结果如图3所示，1～4号菌落需要舍弃的是1号和________。其中舍弃1号菌落的理由是_________________________

_________________________________________________________。;解析：(1)由mRNA得到cDNA，应该通过逆转录酶的作用。进行PCR扩增时，需要2种引物，引物会与