DNA重组技术的基本工具王凯辉课件.pptVIP

*1、1－4的技术发明对基因工程的贡献是什么？为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造条件2、5－6技术为基因工程实施，3,.PCR技术的发明属于发展完善基因工程。4.基因转移载体又叫什么名称?运载体5.工具酶包含哪些?限制酶,DNA连接酶6.DAN合成具备哪些条件?7.DNA测序技术用于基因工程哪个方面?目的基因检测.8.目的基因检测包括哪些内容?9.DNA体外重组的实现的最关键步骤指的是什么?基因表达载体的构件10.重组DNA表达实验的成功的重大意义是什么?克服远源不能杂交障碍,使得不同生物之间可进行基因交流.11.转基因动物使用的受体细胞是什么?受精卵12.目的基因进入受精卵使用什么方法?显微注射法13.7.PCR技术与体内DNA复制有哪些方面的不同?(1)酶不同(2)过程不同,边解旋边复制,全解旋再复制(3)结果不同*1.苏云金芽孢杆菌毒蛋白的基因在什么位置?质粒*1.植物细胞常用的受体细胞是什么?体细胞2.如何获得棉花植株?植物组织培养.*1.目的基因获取的获取有哪些方法(1)直接分离法(2)人工合成法(3)基因文库中获取(4)PCR技术2.抗虫基因导入受体(棉花)细胞使用什么方法?农杆菌转化法*1.基因工程哪一步骤在体外操作?基因表达载体的构建*1.环状DNA还是链状DNA易表达,为什么?链状DNA易表达,因为环状DNA首先要解成链状DNA才能进行进行转录.*1,DNA连接酶连接的对象是单个脱氧核苷酸还是DNA片段?DNA片段*1.两条链复制方向是一致的还是相反的?反向的.1.大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ）能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。2.SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端。GAATTCCTTAAG中轴线CTTAAGAATTCGCCCGGGGGGCCCCCCGGGGGGCCC黏性末端平末端大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，SmaⅠ识别CCCGGG序列:磷酸二酯键即脱氧核糖、磷酸之间的连接ATGGCATCTTCGAA切割DNA分子时产生的两种不同末端限制酶切割DNA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？思考：THANKYOUSUCCESS**可编辑什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。ＥcoRI限制酶SmaI限制酶识别序列－ＣＣＣＧＧＧ－切割位点Ｇ和Ａ之间Ｃ和Ｇ之间未端类型平末端黏性末端－ＣＴＴＡＡＧ－－ＧＧＧＣＣＣ－－ＧＡＡＴＴＣ－4、切割后的形式：2种末端注：1.限制酶是一大类酶，不是一种酶。2.限制酶大多可以专一性识别双链DNA分子上的某种特定核苷酸序列，限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称，重复排列的。3.如果所识别的序列是奇数如5个碱基,则中轴线在中间的碱基对上,除了中轴线外,两侧的双链DNA上的碱基是反向对称黏性末端平末端1.要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。3.如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。思考?2.切下的特定片段上有几个黏性(平)末端?如果直接用DNA连接酶连接会出现什么情形?两个黏性(平)末端;会出现自身环化现象4.如何避免自身环化现象?分别用不同的限制酶切割两个部位,这样就不会出现相同的黏性(平)末端.思考与探究为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。DNA聚合酶DNA连接酶区别1区别