经典色谱法液相.pptVIP

3）注意事项a层析缸必须密闭良好b防止边缘效应边缘效应：同一物质的色谱斑点在同一薄层板上出现的两边缘的Rf值大于中间部分的Rf值的现象。第60页，共89页，星期日，2025年，2月5日原因：色谱缸内溶剂蒸气未达饱和，造成展开剂的蒸发速率在薄层板两边与中间部分不等克服办法：a“预饱和”b层析缸内壁贴浸湿的滤纸条c点样时不要太靠边缘第61页，共89页，星期日，2025年，2月5日c在展开过程中注意恒温恒湿相对湿度硫酸（ml）+水（ml）32%6810042%5710058%39.510065%3410072%27.510088%1.8100温度和湿度的改变会影响Rf值和分离效果，降低重现性。第62页，共89页，星期日，2025年，2月5日对展开剂的基本要求：?不与组分或吸附剂存在化学反应?使样品各组分完全分离?使待测组分的Rf在0.3~0.5?展开后各斑点圆而集中，不拖尾?具有适中的沸点和小的粘度?临用前配制4）展开剂第63页，共89页，星期日，2025年，2月5日①交联度：交联剂（如二乙烯苯）的用量，重量百分比表示阳离子交换树脂交联度以8％，阴离子交换树脂交联度以4％左右为宜。高交联度树脂紧密网状结构，交换速度慢，但选择性好，反之，则具有较好的渗透性，选择性差。2、性能第28页，共89页，星期日，2025年，2月5日②交换容量：每克干树脂含有可交换基团的数目，单位以mmol/g表示。交换容量表示离子交换树脂进行离子交换能力大小。实际交换容量与理论有所不同。③溶胀：树脂吸收水分后，引起的膨胀。溶胀程度取决于交联度高低，交联度高，溶胀小，反之，溶胀大。第29页，共89页，星期日，2025年，2月5日④粒度：交换树脂颗粒的大小，一般以溶胀状态下通过的筛孔来表示。颗粒小，离子交换达到平衡快，但洗脱慢。第30页，共89页，星期日，2025年，2月5日3、离子交换平衡平衡常数KA/B也称离子选择性系数，是衡量某树脂交换能力大小的一种量度。K越大，保留时间越长。第31页，共89页，星期日，2025年，2月5日4、影响选择性系数的因素离子价数越高，水合离子半径越小和离子交换树脂的亲和力越大，即选择系数越大（1）强酸型阳离子交换树脂不同价态的离子，电荷越高，亲和力越强，选择性系数越大，如Th4+＞Al3+＞Ca2+＞Na+一价阳离子的亲和力顺序为Ag+＞Tl+＞Cs+＞Rb+＞K+＞NH4+＞Na+＞H+＞Li+第32页，共89页，星期日，2025年，2月5日（2）强碱型阴离子交换树脂阴离子的亲和力顺序为柠檬酸根＞SO42-＞CrO42-＞I-＞HSO4-＞NO3-＞Br-＞CN-＞NO2-＞Cl-＞HCOO-＞CH3COO-＞OH-＞F-第33页，共89页，星期日，2025年，2月5日5、操作方法及应用（1）树脂处理和再生处理目的：除去杂质、转变为所需要的形式阳离子树脂转变为氢型，阴离子树脂转变为氯型或羟基型。处理方法：树脂再生：第34页，共89页，星期日，2025年，2月5日（2）装柱处理好的树脂加少量水搅拌后倒入色谱柱中，注意防止气泡进入。（3）洗脱洗脱剂一般为水，或弱酸弱碱溶液，必要时加入少量有机溶剂（4）应用除去干扰离子，微量元素的富集、水的纯化等第35页，共89页，星期日，2025年，2月5日第4节空间排阻柱色谱法（SEC）又称为凝胶色谱法、分子排阻色谱法、分子筛色谱法和尺寸排阻色谱法分类：凝胶渗透色谱法（流动相为有机溶剂）凝胶过滤色谱法（流动相为水溶液）作用：用于大分子物质如蛋白质、多糖的分离第36页，共89页，星期日，2025年，2月5日一、基本原理分子筛效应：分子排阻色谱是根据溶质分子大小的不同即分子筛效应而进行分离的。大分子的流程短，移动速度快，先流出色谱柱；小分子的流程长，移动速度慢，后流出色谱柱；而中等分子居两者之间，可使分子大小不一样的混合组分实现分离。第37页，共89页，星期日，2025年，2月5日渗透系数K溶胶孔穴内外同等大小的溶质分子处于扩散平衡状态。渗透系数K由溶质分子的体积大小与孔穴的孔径大小的相对关系决定，与流动相的种类无关。K越大，保留时间越长第38页，共89页，星期日，2025年，2月5日三、操作方法及应用（自学）二、凝胶的分类（自学）第39页，共8