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(生物技术专业)干细胞治疗技术练习题及答案

一、名词解释（每题5分，共20分）

1.多能干细胞（PluripotentStemCells）：指具有分化为三个胚层（外胚层、中胚层、内胚层）来源的几乎所有体细胞类型能力的干细胞，但其无法单独发育成完整个体。典型代表包括胚胎干细胞（ESCs）和诱导多能干细胞（iPSCs），前者来源于囊胚期内细胞团，后者通过体细胞重编程技术获得。

2.间充质干细胞（MesenchymalStemCells,MSCs）：一种成体干细胞，主要存在于骨髓、脂肪、脐带等组织中，具有多向分化潜能（如成骨、成脂、成软骨）及强大的免疫调节能力。其表面缺乏主要组织相容性复合体Ⅱ类分子（MHC-Ⅱ）和共刺激分子（如CD80、CD86），因此免疫原性低，在异体细胞治疗中不易引发严重排斥反应。

3.重编程技术（ReprogrammingTechnology）：通过导入特定转录因子（如Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc）或表观遗传调控手段，将已分化的体细胞（如成纤维细胞）逆转为具有多能性的干细胞（如iPSCs）的技术。该技术突破了胚胎干细胞的伦理限制，为个体化再生医学提供了新途径。

4.免疫豁免（Immunoprivilege）：指某些细胞或组织在异源移植时，因表面分子表达特征（如低表达MHC-Ⅰ类分子、高表达免疫抑制因子如PD-L1、TGF-β）而避免被宿主免疫系统识别和攻击的特性。间充质干细胞和部分胚胎干细胞衍生细胞具有此特性，是其在异体治疗中广泛应用的重要基础。

二、简答题（每题10分，共40分）

1.简述干细胞治疗的核心作用机制

干细胞治疗的核心机制包括以下四方面：

（1）分化替代：干细胞通过定向分化为受损或功能缺失的体细胞（如神经干细胞分化为神经元、胰岛干细胞分化为胰岛β细胞），直接补充组织功能单元；

（2）旁分泌效应：干细胞分泌多种生长因子（如VEGF、bFGF）、细胞因子（如HGF、IGF-1）及外泌体（含miRNA、蛋白质），促进受损组织修复、抑制凋亡、诱导血管新生；

（3）免疫调节：通过分泌抗炎因子（如IL-10、TGF-β）或直接接触免疫细胞（如T细胞、树突状细胞），调节过度激活的免疫系统，缓解自身免疫病（如类风湿关节炎）或移植物抗宿主病（GVHD）；

（4）组织微环境重构：干细胞通过调节细胞外基质（ECM）成分（如胶原、纤连蛋白）及基质金属蛋白酶（MMPs）活性，改善受损组织的物理和生化微环境，为内源性修复创造条件。

2.列举3种临床已获批的干细胞治疗产品，并说明其适应症

（1）Prochymal（间充质干细胞）：由Osiris公司开发，获批用于治疗儿童急性移植物抗宿主病（aGVHD）。其机制为通过抑制T细胞增殖和Th1/Th17分化，减轻免疫攻击；

（2）Cartistem（脐带间充质干细胞）：韩国获批的软骨修复产品，用于治疗膝骨关节炎。干细胞分化为软骨细胞并分泌II型胶原，促进软骨再生；

（3）Hemacord（脐带血造血干细胞）：美国FDA批准用于治疗血液系统恶性肿瘤（如急性淋巴细胞白血病）及某些遗传性疾病（如范可尼贫血），通过移植重建患者造血和免疫系统。

3.简述诱导多能干细胞（iPSCs）的制备流程及主要技术难点

制备流程：

①取材：获取体细胞（如皮肤成纤维细胞、外周血单核细胞）；

②重编程因子导入：通过病毒载体（如慢病毒、腺病毒）或非整合方法（如mRNA转染、小分子化合物）导入Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc（Yamanaka因子）；

③培养筛选：将细胞接种于饲养层（如小鼠胚胎成纤维细胞）或无饲养层体系（如Matrigel），使用ESCs培养基（含bFGF）培养，约2-3周后出现iPSCs克隆；

④鉴定：通过形态学观察（克隆呈鸟巢状）、多能性标记检测（如SSEA-4、TRA-1-60）、体外分化实验（形成拟胚体）及核型分析（确保无染色体异常）。

技术难点：

①重编程效率低（传统方法仅0.01%-0.1%）；

②病毒载体整合导致插入突变风险；

③部分iPSCs存在表观遗传记忆（如保留原体细胞的基因表达模式），影响分化潜能；

④规模化培养时的均一性控制（如细胞异质性导致分化方向不一致）。

4.说明间充质干细胞（MSCs）体外扩增的关键挑战及解决策略

关键挑战：

（1）增殖能力衰退：MSCs在体外传代（通常5代）后，增殖速度下降，细胞周期停滞于G0/G1期，伴随衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）表达增加；

（2）分化潜能丢失：长期培养导致多向分化能力（如成骨、成脂）减弱，可能与RUNX2、PPAR-γ等转录因子