蛋白质相互作用.pptxVIP

蛋白质互相作用Protein-proteininteractions

2蛋白质互相作用（protein-protein?interaction,?PPI）是指两個或两個以上的蛋白质分子通過非共价键形成?蛋白质复合体（protein?complex）的過程。

概念

0102030405060708091011121314151617181920212223242526272829MayMondayWednesdayTuesdayThursdayFridaySaturdaySunday蛋白质相互作用的实验技术2研究蛋白质相互作用的生物信息学方法3蛋白质相互作用的分子结构基础1Contents目录3031

蛋白质互相作用的分子构造基础Chapter14

互相作用区域是蛋白质互相作用的构造基础

InteractionDomain-Structralbasisforproteininteraction蛋白质之间的互相作用与其所具有的特定构造域密不可分。經典蛋白质互相作用的构造域是壹种具有結合专壹性的独立折叠元件，可以插入新的蛋白质中并保留結合靶部位的能力。它們的互相作用多是通過2個多肽表面几何构型和静電力而互相连接。PDZ构造域LIM构造域DD构造域SH构造域PH构造域EH构造域

互相作用区域是蛋白质互相作用的构造基础

InteractionDomain-StructralbasisforproteininteractionPDZ构造域LIM构造域

互相作用区域是蛋白质互相作用的构造基础

InteractionDomain-StructralbasisforproteininteractionDD构造域4.SH构造域

互相作用区域是蛋白质互相作用的构造基础

InteractionDomain-StructralbasisforproteininteractionPH构造域6.EH构造域

蛋白质互相作用的试验技术Chapter29

蛋白质互相作用研究措施酵母双杂交系统(Yeasttwo-hybridsystem,Y2H)串联亲和纯化(Tandemaffinitypurification,TAP)免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)GSTPull-down双分子荧光互补(Bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC)荧光共振能量转移(Fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET)表面等离子共振分析(Surfaceplasmonreson-anceanalysis)蛋白质芯片技术

酵母双杂交系统(Yeasttwo-hybridsystem,Y2H)

原理：理论基础是诸多真核生物的转录因子由两個有不壹样功能的构造域构成：转录激活构造域(Transcriptionalactivationdomain,AD)和DNA結合构造域(DNAbindingdomain,BD)。

長处：简便、易用、费用低廉,能检测到瞬時或较弱的蛋白质互相作用。缺陷：较高的假阳性，不能真实反应蛋白质在自身细胞中的互相作用

串联亲和纯化(Tandemaffinitypurification,TAP

原理：老式的TAP標签蛋白由ProteinA、TEV蛋白酶可剪切序列和钙调蛋白結合肽(Calmodulin-bindingpeptide,CBP)构成。AP技术通過两步亲和纯化来減少非特异性蛋白結合。長处：首先，TAP能減少非特异性蛋白結合；另壹方面，TAP能保留蛋白复合物在细胞内的修饰和結合状态。缺陷：需要较多的样本材料来提取蛋白，价格比较昂贵，不能高效检测到瞬時或较弱的蛋白质互相作用

免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)

原理：运用抗体和抗原之间特异性的识别和結合，通過亲和纯化，分离出抗原蛋白和單克隆抗体。長处：保留蛋白质的修饰和結合状态，同步所需的样本量较少。缺陷：Co-IP特异性较低

双分子荧光互补(BiFC)

原理：将荧光蛋白提成两個無独立功能的片段，分别与bait蛋白和prey蛋白融合体現。長处：能简朴以便地通過观测荧光鉴定蛋白质互相作用缺陷：不能实時反应蛋白质的結合和分离状况。

荧光共振能量转移(FRET)

原理：FRET在蛋白质互相作用研究的基本原理是分别将bait蛋白、prey蛋白与對应的供体荧光基团(如ECFP)和受体荧光基团(如EYFP)融合長处：能检测到瞬時、较弱的蛋白质互相