2025年大学《生物技术》专业题库—— 多肽合成技术在生物技术中的发展.docxVIP

2025年大学《生物技术》专业题库——多肽合成技术在生物技术中的发展

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、名词解释（每题3分，共15分）

1.Fmoc

2.Boc

3.固相合成

4.液相合成

5.叠氮-炔环加成

二、简答题（每题5分，共20分）

1.简述Fmoc固相合成中，一个氨基酸单元的引入和去除（拆除）的基本步骤。

2.与液相合成相比，简述固相合成在操作和纯化方面的主要优势。

3.阐述酶促多肽合成在生物技术应用中相较于化学合成的主要优势。

4.简述多肽合成技术在开发治疗高血压药物中的基本原理和应用实例。

三、论述题（每题15分，共30分）

1.论述自动化多肽合成平台的发展对生物技术研究和产业化的重要意义。

2.结合具体实例，论述片段连接策略在合成复杂生物大分子（如蛋白质）类似物中的关键作用和发展趋势。

四、设计题（20分）

假设需要合成一个含有Cys和Met两个半胱氨酸残基的二肽类似物，该类似物需要在Cys残基的硫原子和Met残基的甲硫氨酸侧链上分别引入一个荧光报告基团和一个亲和标签（如生物素）。请简述一个合理的合成策略，说明选择该策略的原因，并概述合成过程中需要注意的关键步骤和潜在问题。

试卷答案

一、名词解释

1.Fmoc：N-芪甲氧基甲酰氨基（Fluorenylmethyloxycarbonyl），一种常用的氨基酸氨基保护基，在多肽固相合成中用于保护氨基酸的氨基，在偶联反应后通过酸性条件（如Pd-C或HCl）可被高效去除。

2.Boc：N-叔丁氧基羰基（tert-Butoxycarbonyl），一种常用的氨基酸羧基保护基，在多肽液相合成或某些固相合成中用于保护氨基酸的羧基，在碱性条件下通过亲核取代反应（如与氨或氨基受体反应）可被去除。

3.固相合成：一种多肽合成方法，将连接臂带有保护基的氨基酸固载在载体（如树脂）上，通过重复的氨基酸引入、偶联、保护基去除（针对氨基）和载体脱落（合成结束后）的步骤，最终得到多肽，无需频繁进行纯化。

4.液相合成：一种多肽合成方法，在溶液中将具有保护基和侧链保护（通常需要）的氨基酸按顺序进行缩合反应，每步缩合后需要通过色谱等方法进行纯化以去除副产物，过程繁琐，适用于合成短肽。

5.叠氮-炔环加成：一种基于点击化学的片段连接策略，利用带有叠氮基团（-N3）和一个羧基（通常连接在连接臂上）的片段和一个带有炔基（-C≡C-）和一个氨基（通常连接在连接臂或目标位点）的片段，在铜催化（Cu(I)催化剂）或光催化条件下发生环加成反应，高效、特异性地连接两个片段，常用于合成蛋白质类似物或进行位点特异性修饰。

二、简答题

1.Fmoc固相合成中，一个氨基酸单元的引入和去除（拆除）的基本步骤：

*引入：首先，在固相合成仪或手动操作中，将带有Fmoc保护的氨基和连接臂的起始氨基酸（或上一轮合成的肽链）连接到固相载体上。然后，在活化条件下（常用三氟甲磺酸酐/DMAP或HATU），活化该氨基酸的羧基。最后，在无水、无氧条件下，将活化的氨基酸与载体上的肽链进行缩合反应，形成肽键。反应结束后，通常用二氯甲烷（DCM）洗涤去除未反应的原料和副产物。

*拆除：在确认缩合成功后，用酸性溶液（常用20%piperidineinDMF）处理固相载体，使Fmoc保护基团在酸性条件下水解去除，暴露出自由氨基。反应结束后，用DMF或DCM洗涤去除piperidine和副产物，此时载体上连接的是带有自由氨基的肽链，可以继续进行下一轮氨基酸的引入。

2.与液相合成相比，固相合成在操作和纯化方面的主要优势：

*操作简便：氨基酸引入、保护基去除、侧链保护/拆卸等步骤高度自动化，操作简单，重复性好。

*无需纯化：每步缩合反应都在固相上进行，副产物（如去保护产生的酸）留在溶液中，主产物（肽链）连接在固相载体上，避免了液相合成中每步都需要进行复杂的色谱纯化，大大简化了操作流程，节省了时间和溶剂。

*产率高：由于避免了液相纯化的损失，固相合成的整体产率通常较高。

*易于处理长肽：可以方便地合成几百甚至上千个氨基酸残基的长链多肽，而液相合成长肽难度大、产率低。

3.酶促多肽合成在生物技术应用中相较于化学合成的主要优势：

*条件温和：通常在生理或接近生理的条件下（如中性pH、温和温度、水相环境）进行，能耗低，环境友好。

*高区域选择性和立体选择性：酶是高度特异性的催化剂，可以精确控制反应位点，避免产生不想要的副产物，尤其适用于合成手性多肽或具有复杂结构单元的多肽。

*生