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《园艺植物离体培养》复习思考题及答案

1.简述园艺植物离体培养中外植体的定义及其选择原则。

外植体是指从活体植株上切取的用于离体培养的组织、器官或细胞等材料。选择原则包括：①遗传稳定性：优先选择遗传背景清晰、性状优良的母株，避免杂合体或变异材料影响后代一致性；②生理状态：取幼嫩组织（如茎尖、幼叶），因其细胞分裂能力强、脱分化潜力大；成熟组织（如老叶、木质部）易褐变且分化能力弱；③取材时间：生长旺盛期（如春季）的外植体生理活性高，污染率低；④大小与类型：根据培养目标选择，快速繁殖多取茎尖或带芽茎段（保留分生组织），体细胞胚发生可取子叶或下胚轴（分化能力强）；⑤无病虫害：严格筛选健康母株，避免携带病毒、真菌或细菌，降低后续污染风险。

2.比较MS培养基、B5培养基和White培养基的主要差异及适用范围。

MS培养基（MurashigeSkoog）是最常用的通用培养基，特点是高浓度无机盐（尤其是硝酸盐、铵盐和钾盐），适合多数双子叶植物（如番茄、月季）和部分单子叶植物的快速繁殖与愈伤诱导；B5培养基（GamborgB5）降低了铵盐浓度（以硝酸钾为主要氮源），提高了钼酸盐含量，更适合豆科植物（如大豆、三叶草）及某些单子叶植物（如洋葱）的细胞培养，可减少铵离子对细胞的毒害；White培养基无机盐浓度最低（仅为MS的1/4），尤其钙、镁、钾含量低，多用于根的离体培养（如胡萝卜根段）或某些对盐敏感植物（如兰花原球茎分化阶段），避免高盐抑制根的伸长。三者的有机成分（如维生素、肌醇）差异较小，但MS含较高的甘氨酸，B5含较高的维生素B1（硫胺素），White仅含少量维生素。

3.分析植物离体培养中褐变现象的发生机制及防控措施。

褐变是外植体或愈伤组织切口处产生褐色物质（主要为醌类化合物）并导致细胞死亡的现象。机制：外植体受伤后，细胞结构破坏，胞内多酚氧化酶（PPO）与酚类底物（如绿原酸、儿茶酚）接触，催化酚类氧化为醌类，醌类进一步聚合形成褐色的黑色素。影响因素包括：①外植体特性（木本植物＞草本，成熟组织＞幼嫩组织）；②培养条件（高温度、强光照促进PPO活性）；③培养基成分（高浓度蔗糖或细胞分裂素可能加剧褐变）。

防控措施：①选择幼嫩外植体（如茎尖、顶芽），减少酚类物质含量；②预处理：外植体切割后用0.1%-0.5%抗坏血酸（VC）或1%活性炭（AC）溶液浸泡10-30分钟，抑制PPO活性；③调整培养基：添加0.5-2mg/L的半胱氨酸、谷胱甘肽等抗氧化剂，或降低无机盐浓度（如使用1/2MS）；④暗培养初期（3-7天）：减少光照抑制PPO激活；⑤缩短继代周期（每15-20天转接一次），避免褐变物质积累。

4.说明玻璃化苗的典型特征、形成原因及解决方法。

玻璃化苗（水渍苗）是离体培养中常见的异常苗，特征为：叶片半透明、水渍状，茎秆脆弱易折，叶尖卷曲，叶绿素含量低，无法正常移栽成活。形成原因：①环境因素：培养容器内湿度高（＞90%）、通气性差（如封口膜过紧），导致蒸腾作用受阻，细胞吸水过度；②培养基成分：高浓度细胞分裂素（如6-BA＞2mg/L）或铵态氮（NH4+）促进乙烯合成，诱导细胞异常膨大；③光照不足（＜1500lx）或光质单一（如蓝光缺失），影响叶绿体发育；④琼脂浓度低（＜6g/L）或蔗糖浓度低（＜20g/L），培养基渗透势过高，细胞吸水失衡。

解决方法：①改善通气：使用透气封口膜（如棉塞+牛皮纸），或在容器内放置干燥硅胶降低湿度；②调整激素：减少细胞分裂素用量（如6-BA降至0.5-1mg/L），增加生长素（如NAA0.1-0.3mg/L）平衡生长；③提高渗透压：增加琼脂浓度（7-8g/L）或蔗糖浓度（30-40g/L），降低培养基水分有效性；④增强光照：提高光强（2000-3000lx）或补充蓝光（LED光源），促进叶绿体发育；⑤添加辅助物质：加入0.1-0.5mg/L的矮壮素（CCC）或多效唑（PP333），抑制细胞过度伸长。

5.详述园艺植物茎尖脱毒培养的技术要点及脱毒效果检测方法。

技术要点：①外植体选择：取0.1-0.5mm的茎尖（含1-2个叶原基），因病毒在分生组织中分布极少（顶端3-5个细胞无病毒）；②消毒处理：母株先经2-4周温汤处理（35-38℃）抑制病毒复制，茎尖用75%酒精（10-30秒）+0.1%升汞（5-8分钟）消毒，无菌水冲洗3-5次；③培养基：启动培养基为MS+0.1-0.5mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA，促进茎尖分化；增殖培养基降低细胞分裂素浓度（0.1-0.2mg/L6-BA），避免玻璃化；④培养条件：温度25±2℃，光照16小时/天（光强2000-3000lx），湿度70%-80%；⑤继代与生根：茎尖分化成苗后，转接至1/2MS+0.5-