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优化评估肠道固有层B淋巴细胞高效提取技术方法研究
目录
文档概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.1肠道固有层结构与功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.2B淋巴细胞在肠道免疫中的作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.3提取技术的现状与挑战．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
肠道固有层B淋巴细胞提取方法综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
2.1传统提取方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
2.1.1液体培养法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
2.1.2组织匀浆法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
2.1.3磨碎法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
2.2新型提取方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
2.2.1微流控技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
2.2.2纳米技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
2.2.3核磁共振技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
提取技术优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
3.1提取试剂的选择与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
3.1.1抗凝剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
3.1.2磷酸盐缓冲液．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
3.1.3溶剂体系．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
3.2提取条件的优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
3.3提取效率的评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
3.3.1细胞存活率．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
3.3.2细胞计数．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
实验设计与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
4.1实验材料与设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
4.1.1肠道组织样本．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
4.1.2提取试剂与设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
4.2实验方案．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
4.2.1提取步骤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
4.2.2细胞培养与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
结果与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
5.1不同提取方法的比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55
5.1.1细胞存活率．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59
5.1.2细胞纯度．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．60
5.1.3B淋巴细胞表达的指标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．61
5.2提取效率的影响因素分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．65
5.3优化后的提取方法的实用性评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．69
结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．
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