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实验动物学灭菌操作规定

一、实验动物学灭菌操作概述

实验动物学灭菌操作是保障实验动物健康、防止交叉感染和确保实验结果准确性的关键环节。规范的灭菌操作能够有效杀灭或去除实验动物环境中存在的病原微生物，降低实验风险。本规定旨在明确灭菌操作的标准流程、注意事项及适用范围，确保各项操作符合生物安全要求。

二、灭菌操作的基本原则

（一）标准化操作流程

1.所有灭菌操作必须遵循既定的标准化流程，确保每一步骤的准确执行。

2.操作人员需经过专业培训，熟悉灭菌设备的使用方法和注意事项。

3.灭菌前需对物品进行预处理，如清洁、干燥，以提高灭菌效果。

（二）分类处理原则

1.根据物品类型（如器械、耗材、环境表面等）选择合适的灭菌方法。

2.高风险物品（如手术器械）需采用更严格的灭菌标准。

3.低风险物品可适当简化灭菌流程，但仍需确保病原微生物被有效控制。

（三）环境控制要求

1.灭菌操作应在洁净环境中进行，避免外界污染。

2.灭菌区域需定期消毒，并保持相对密闭。

3.操作前后需使用消毒剂对工作台面和设备进行清洁。

三、常用灭菌方法及操作规范

（一）物理灭菌法

1.高温高压灭菌（Autoclave）

(1)设备准备：检查高压灭菌锅的压力表、温度计是否正常，确保蒸汽循环通畅。

(2)物品装载：将物品均匀放置在灭菌锅内，避免过度堆叠，确保蒸汽穿透。

(3)参数设置：根据物品类型设定灭菌温度（通常121℃）、压力（1.05kg/cm2）和时间（15-30分钟）。

(4)操作步骤：关闭锅盖，启动灭菌程序，灭菌完成后自然冷却或使用专用排气阀减压。

(5)验证方法：使用生物指示剂（如嗜热脂肪芽孢）验证灭菌效果，确保灭菌参数达标。

2.干热灭菌（HotAirOven）

(1)设备准备：检查干热灭菌箱的温度均匀性，确保无死角。

(2)物品装载：将物品平铺在灭菌箱内，避免遮挡加热元件。

(3)参数设置：设定灭菌温度（160-180℃）和时间（2-4小时）。

(4)操作步骤：关闭箱门，启动灭菌程序，灭菌完成后待温度降至安全范围后取出物品。

(5)验证方法：使用化学指示剂或生物指示剂进行效果验证。

（二）化学灭菌法

1.伽马射线灭菌

(1)设备准备：检查伽马射线灭菌腔的辐射剂量计是否校准。

(2)物品装载：将物品放入专用灭菌袋，确保密封性。

(3)参数设置：根据物品类型设定辐射剂量（通常25-50kGy）。

(4)操作步骤：将灭菌袋放入灭菌腔，启动辐射程序，灭菌完成后取出物品。

(5)验证方法：使用生物指示剂验证辐射剂量是否达到灭菌标准。

2.化学气体灭菌（如环氧乙烷）

(1)设备准备：检查环氧乙烷灭菌器的真空系统、气体浓度监测仪是否正常。

(2)物品装载：将物品放入专用灭菌袋，避免水分残留。

(3)参数设置：设定灭菌程序（通常包括预处理、灭菌、解吸、通风阶段）。

(4)操作步骤：关闭舱门，启动灭菌程序，灭菌完成后进行充分通风，确保气体完全排出。

(5)验证方法：使用生物指示剂验证灭菌效果，并检测残留气体浓度是否低于安全限值。

（三）环境表面灭菌

1.湿法消毒

(1)消毒剂选择：使用70%-80%的酒精或含氯消毒剂（如0.1%-0.5%次氯酸钠溶液）。

(2)操作步骤：用浸湿消毒剂的拖布或喷雾器擦拭表面，确保覆盖均匀。

(3)等待时间：根据消毒剂说明，确保作用时间（通常15-30分钟）。

(4)清洁处理：消毒后用清水擦拭，去除残留消毒剂。

2.干法消毒

(1)消毒剂选择：使用过氧化氢蒸汽或二氧化氯气体。

(2)操作步骤：按照设备说明进行气体熏蒸，确保密闭环境。

(3)等待时间：根据消毒剂浓度和温度，通常需要30-60分钟。

(4)通风处理：消毒完成后充分通风，确保残留气体散尽。

四、灭菌效果的验证

（一）生物指示剂验证

1.常用指示剂：使用嗜热脂肪芽孢（如sporesof*Bacillusstearothermophilus*）。

2.操作方法：将指示剂与待灭菌物品一同灭菌，培养后观察是否无菌生长。

3.阳性对照：同时设置未灭菌的指示剂作为阳性对照，确保实验有效性。

（二）化学指示剂验证

1.常用指示剂：使用包含变色物质的化学指示卡或标签。

2.验证标准：根据指示剂的变色情况判断是否达到灭菌条件（如高温高压下的黄色变黑）。

（三）环境监测

1.空气菌落数：使用settleplates或airsamplingmethods检测灭菌区域空气中的微生物数量。

2.拉取样本：在灭菌前后对环境表面（如工作台、设备）进行菌落计数，确保灭菌效果。

五、操作记录与安全管理

（一）操作记录

1.每次灭菌操作需填写记录表，包括灭菌日期、物品名称、灭菌方法、参数设置