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黑盖木层孔菌菌丝体多糖的研究：分离纯化、结构解析与活性探究

一、引言

（一）真菌多糖研究进展

真菌多糖作为一类从食药用真菌子实体、菌丝体和发酵液中分离出的代谢产物，在国际上被称为“生物反应调节剂”，在医药、食品等领域展现出巨大的应用潜力，已成为当前研究的热点。

从结构上看，真菌多糖是由许多单糖分子以糖苷键结合而成的天然高分子化合物，其结构可分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。一级结构关乎单糖残基的组成、排列序列及连接方式等，像香菇多糖、茯苓多糖、云芝多糖等真菌多糖的主链便是以β（1→3）糖苷键连接为主，兼有少量β（1→4）、（1→6）或其他糖苷键；而虫草多糖、银耳多糖、灵芝多糖等则主要由α糖苷键连接，以α（1→3）、α（1→2）糖苷键为主，侧链有α（1→3）、（1→5）和（1→6）糖苷键。二级结构是多糖骨架链间通过氢键结合形成的聚合体，只涉及分子主链构象，与侧链空间排布无关。三级结构由多糖中糖残基的羟基、羧基、氨基及其他功能团通过非共价作用，形成有序、规则且粗大的空间构象。四级结构则是多糖多聚链间以非共价作用力结合形成的聚集体，其构型包括可拉伸带状、卷曲螺旋状、皱纹状、不规则卷曲状。

真菌多糖多样的生物活性也使其备受关注。在抗肿瘤方面，众多研究表明，高等真菌中已有50个属178种的提取物具备抑制小鼠S-180肉瘤及艾氏腹水瘤等细胞生长的生物学效应，其作用机制主要包括诱导肿瘤细胞凋亡，如影响凋亡蛋白表达；干扰细胞循环，像调控周期蛋白和激酶；增强机体免疫，比如调节免疫细胞因子等，对肝癌、肺癌、前列腺癌等多种癌细胞都能起到抑制效果。在免疫调节方面，真菌多糖能通过作用于单核巨噬细胞、细胞免疫系统和体液免疫系统等多个层次，提升机体免疫力。例如，唐省三等人利用复合真菌多糖（猴头菇、香菇、茯苓真菌多糖）进行研究，发现其可明显升高S180肉瘤小鼠腹腔巨噬细胞的活性；姚金凤等发现海洋真菌多糖能促进巨噬细胞NO、IL-1的合成，还能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。另外，真菌多糖还具有抗氧化、抑菌、降血糖血脂、护肝等多种功效，在预防疾病、食品保鲜、消炎抑菌等领域发挥着重要作用。

在提取分离纯化技术上，热水浸提法凭借多糖的水溶性原理进行操作，虽然耗时但方法简单，如李瑞雪等优化工艺后，菌丝体多糖得率达4.97%；酸碱提取法通过酸碱使细胞壁破裂来提取，得率较高，不过需严格控制酸碱浓度，Wang等利用特定碱液提取，获得了高含量糖及抗氧化活性多糖；超声波和微波提取法借助物理作用，具备快速高效的优势，应瑞峰等优化后，多糖得率超10%；此外，还有酶解法、三相分离提取法等。在分离时，常利用多糖不溶于乙醇等有机溶剂的特性，通过调节乙醇浓度来分离不同分子量和性质的多糖，同时结合冷冻干燥及合适的去蛋白方法，能提高多糖得率与活性。纯化方法有乙醇分步沉淀法、盐析法、季铵盐沉淀法和色谱层析法等，其中色谱层析法应用最为广泛，通过阴离子交换层析和凝胶层析可有效纯化多糖，如Li等利用该方法纯化得到了具有抑制癌细胞作用的多糖，Yan等纯化出了特定分子量和组成的中性异质性多糖。

（二）黑盖木层孔菌的研究价值

黑盖木层孔菌（Phellinusnigricans）属锈革孔菌科（Hymenochaetaceae）针层孔菌属（Phellinus），别名黑盖针层孔、黑木层孔菌，是一种常见的木质分解真菌，在传统医学中有着悠久的应用历史。

现代研究表明，黑盖木层孔菌能强烈地分解木材，这与其分泌的多种胞外酶密切相关。它能够分泌β-葡聚糖酶、β-葡聚糖生物质酶、CMCase等纤维素酶，其中β-葡聚糖酶具有较强的纤维素水解能力，可将纤维素水解为葡萄糖单体；其木质素过氧化物酶活性较高，能将木质素分子中的芳香环氧化为加氧的羟基，从而促进木质素的分解；多酚氧化酶可氧化多酚类物质，包括琥珀酸、酚类化合物等，该酶活性与黑盖木层孔菌的分解能力紧密相关；此外，它还能分泌酪蛋白酶、酸性蛋白酶等胞外蛋白酶，虽然蛋白酶活性较低，但对动物组织蛋白质的分解仍具有一定作用；异丙苯氧化酶也具有较强的催化能力，可以氧化多种有机物质，如脂肪酸、醇类等。

黑盖木层孔菌的菌丝体多糖更是具有多种生物活性。相关研究显示，它与同属的桑黄一样，具备较好的抗癌抗肿瘤功能，发挥作用的组分主要也是其多糖部分。李霞等人的研究发现，黑盖木层孔菌经液体发酵培养后，从菌丝体和发酵液中分离纯化得到的水溶性多糖PNW1和PNM1，均能抑制小鼠体内移植性肉瘤Sarcoma180的生长，在400mg/kg剂量时，连续灌胃10天，菌丝体多糖PNW1的抑瘤率可达74.70％，优于发酵液多糖PNM1（55.84％）。然而，目前对黑盖木层孔菌多糖的分