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CRISPRCas9技术在FAM50A基因敲除中的应用探索
目录
CRISPRCas9技术在FAM50A基因敲除中的应用探索（1）．．．．．．．．．．．．3
文档概览．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.1CRISPR-Cas9技术简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.2FAM50A基因功能概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
FAM50A基因敲除实验设计与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
2.1CRISPR-Cas9系统的构建与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
2.2FAM50A基因靶点的确定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
2.3基因敲除细胞系的建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
FAM50A基因敲除对细胞表型的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
3.1细胞生长与增殖变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
3.2细胞凋亡与死亡机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
3.3细胞代谢与氧化应激．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
FAM50A基因敲除在疾病模型中的研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
4.1肾脏疾病模型．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
4.2神经系统疾病模型．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
4.3其他相关疾病模型．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
FAM50A基因敲除的机制研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
5.1FAM50A蛋白的结构与功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
5.2FAM50A与其他基因的相互作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
6.1FAM50A基因敲除的研究意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
6.2未来的研究方向．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
CRISPRCas9技术在FAM50A基因敲除中的应用探索（2）．．．．．．．．．．．45
一、内容概要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
1.2研究目的与内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51
二、CRISPR-Cas9技术简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
2.1CRISPR-Cas9系统原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53
2.2技术发展历程与应用领域．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54
三、FAM50A基因功能与研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56
3.1FAM50A基因概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58
3.2先前研究进展与存在的问题．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59
四、CRISPRCas9在FAM50A基因敲除中的实验设计．．．．．．．．．．．．．．．．60
4.1实验材料准备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．61
4.2靶细胞系的构建与培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．67
4.3导入载体的设计与制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．69
五、CRISPRCas9在FAM50A基因敲除中的实验实施．．．．．．．．．．．．．．．．71
5.1DNA切割与修复．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．
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