2025年大学《化学生物学》专业题库—— 生物学专业实习技能培养.docxVIP

2025年大学《化学生物学》专业题库——生物学专业实习技能培养

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、

简述在进行蛋白质体外纯化时，选择缓冲液应考虑哪些关键因素，并说明这些因素为何重要。

二、

解释什么是分子克隆中的“正向筛选”和“负向筛选”，并各举一个在特定实验中应用这两个筛选方法的例子。

三、

在进行细胞培养实验时，无菌操作是至关重要的。请列举至少三项关键的无菌操作规范，并简述每项规范的目的。

四、

质谱技术是化学生物学研究中常用的蛋白质组学分析手段。请简述质谱技术在鉴定蛋白质种类和相对定量方面各自的基本原理和常用方法。

五、

设计一个简单的实验方案，用于检测某基因在特定细胞刺激下是否发生转录水平的上调。请写出该方案的核心步骤，包括所需的主要试剂或技术。

六、

简述生物信息学工具在分析基因表达谱数据中的作用。列举至少两种不同的生物信息学分析方法，并说明它们各自可以提供哪些类型的信息。

七、

某学生在实习中遇到一个问题：在进行WesternBlot实验时，得到的条带模糊不清。请分析可能造成这种现象的几种原因，并提出相应的排查和改进措施。

八、

基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）在生物学研究和生物技术领域应用广泛。请讨论在利用基因编辑技术进行基因功能研究时，需要注意的伦理问题有哪些。

九、

解释什么是“假阳性”和“假阴性”在实验结果判读中的含义。结合一个具体的生物学实验例子，说明如何通过设计对照实验来减少假阳性和假阴性的发生。

十、

阅读以下模拟的实验结果描述：“在A实验组中，处理后的细胞相比对照组，其培养基上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）释放量显著增加；在B实验组中，处理后的细胞相比对照组，其活力指示剂MTT消耗量显著减少。”请根据这些结果，简要推测A、B两组实验可能分别研究的是细胞哪种方面的变化，并说明理由。

试卷答案

一、

选择缓冲液需考虑：①pH值（需与目标蛋白的pI接近，维持其稳定性和活性）；②离子强度（影响蛋白质溶解度、电泳迁移率及酶活性）；③含有的抑制物（如EDTA螯合金属离子，防止金属离子辅助的酶降解或非特异性吸附）；④渗透压（需与细胞内环境相仿，防止细胞破裂）；⑤添加剂（如甘油用于稳定，蔗糖用于密度梯度离心）。这些因素重要，因为它们直接关系到蛋白质在纯化过程中的结构稳定、活性保持、溶解度、纯化效率以及下游应用的可行性。

二、

正向筛选是直接筛选出表达或具有特定表型的转化子，例如在构建基因文库后，通过抗生素抗性筛选出成功导入质粒的细菌。负向筛选是筛选出未发生特定事件或缺乏特定表型的转化子，例如在基因敲除实验中，通过筛选对某种药物敏感的细胞（因为敲除了抵抗该药物的外源基因）来确认基因是否被成功敲除。例子：正向筛选例子：利用NcoI和XhoI双酶切鉴定成功插入报告基因的载体；负向筛选例子：在基因敲除后，通过PCR或SouthernBlot检测未发现目标基因条带来确认敲除成功。

三、

关键的无菌操作规范及目的：①使用酒精灯火焰周围无菌区域操作，目的在于利用火焰产生的热力杀灭空气中和物体表面上的微生物；②所有进入细胞培养环境的器皿、器械必须高压蒸汽灭菌或经过其他有效消毒处理，目的在于彻底杀灭潜在的污染源；③操作过程中尽量减少暴露在空气中的时间，并使用无菌罩或超净工作台，目的在于减少空气中悬浮微生物落入培养物的机会；④手部需严格消毒（如使用70-75%酒精擦拭）后才能接触培养物，目的在于防止来自操作人员自身的微生物污染。

四、

质谱鉴定蛋白质种类的原理是基于蛋白质或其酶解多肽链的质荷比（m/z）差异。常用方法如：质谱飞行时间（Time-of-Flight,TOF）分析，通过测量带电离子在无场空间中的飞行时间来精确测定m/z；串联质谱（TandemMassSpectrometry,MS/MS），首先通过MS初步分离离子，再利用碎裂器将离子打碎，分析碎片离子的m/z比，依据碎片谱图与蛋白质数据库的匹配来鉴定蛋白质。质谱进行相对定量的原理是基于在相同条件下，目标蛋白质离子峰的强度与其在样本中的相对丰度成正比。常用方法如：同位素稀释质谱（IsotopeDilutionMS），在样本中加入已知丰度的同位素标记物，比较目标肽段与标记肽段的峰强度进行定量；基于内标或外标的定量方法等。

五、

实验方案核心步骤：①提取处理前后细胞的总RNA；②使用RNA检测仪检测RNA质量和浓度；③将合格的RNA反转录为cDNA；④使用特异性引物通过qPCR（实时荧光定量PCR）检测目标基因的cDNA量；⑤使用内参基因（如GAPDH或β-actin）的cDNA量进行标准化，计算目标基因的相对表达量。所需主要试剂或技术包括：TRIzol试剂或RNeasyMiniKit（RNA提取）