性病实验室检测的关键技术统一标准和操作作业规程.docVIP

江干区人民医院

性病试验室检测操作规程

参考标准1、医疗机构性病门诊规范化管理资料汇编，

2、试剂相关说明书

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目录

TOC\o1-3\h\z\u一、淋病检验试验室技术 2

(一)分泌物涂片检验 2

（二）淋球菌分离培养 3

（三）淋球菌保留 4

（四）氧化酶试验 5

二、支原体检测 5

三、衣原体检验 6

四、梅毒试验室检测 7

(一)直接镜检 8

（二）非特异性梅毒螺旋体试验 8

五、TPHA梅毒螺旋体血凝试验 9

一、淋病检验试验室技术

(一)分泌物涂片检验

急性淋菌性尿道炎患者常有大量脓性分泌物。在有些脓细胞内可见革兰氏染色呈阴性双球菌，椭圆或球形，常成双排列。因形态特殊，可取患者尿道分泌物制成涂片后染色，检验有没有经典细胞内革兰阴性双球菌，可作为初步诊疗依据。

标本采集

尿道分泌物、宫颈粘液、尿离心沉淀物。

涂片镜检

涂片后，待自然干燥后，加热固定，行革兰氏染色，油镜观察。

结果

在急性患者尿道脓性分泌物革兰染色涂片中，常可见到大量红色多形核白细胞，有些细胞中吞噬有淋球菌。多数多形核白细胞中并不含淋菌，但不少细胞中常含有1对或数对，甚至20~30对。淋球菌常存在于细胞浆内。

在病期较长或经过诊疗淋病患者涂片中淋球菌比较少，有时呈单个、四联和八叠状，且常在细胞外。

对有些细菌难以下结论时，需进行培养和判定。

注意事项

1．涂片时不要用力涂擦，而应将棉拭在玻片上轻轻滚动。涂擦过重，细胞轻易破裂变形，致细菌从胞内溢出。

2．涂片厚薄适宜。过厚，加之染色过程中脱色时间不足，革兰染色易呈紫色。所以，脱色时间要视涂片厚薄而定。

3．固定涂片时，快速经过火焰2~3次，避免加热过分使细胞变形。热度以不烫手为宜。

4．不推荐用涂片检验来诊疗淋菌直肠和咽部感染，也不推荐用来作判愈。

方法评价

涂片检验方法简便、有效、价格低廉且有一定敏感性和特异性。但其特异性随取材部位不一样而有所不一样。男性尿道取材特异性较高，而从女性子宫颈取材特异性较低。所以，世界卫生组织不推荐用涂片法来诊疗女性患者。

革兰氏染色

（一）操作步骤

细菌涂片须经火焰固定。

先用甲液滴加在标本上，加量以盖住标本为准，再加等量乙液，混匀，染3-5秒，用自来水从玻片一端冲去染液，甩干。

滴加适量碱性碘液在标本上，3-5秒后，自来水冲洗，甩干。

丙酮酒精脱色，脱色标本为：当丙酮酒精滴加在标本上，不出现蓝色或淡紫色为宜。

用碱性复红复染，覆盖标本，3-5秒后，自来水冲洗，待其自然干燥或用吸水纸吸干，油镜观察。（二）淋球菌分离培养

假如标本中有淋球菌，则在适宜培养基上经培养后可长成菌落。多种细菌在培养基上生长菌落形态各不相同。依据菌落大小，表面高起或扁平、光泽、色素和边缘情况等，作为细菌判定标准。

1．方法

（1）取材

培养要取得成功，取材部位和方法要正确。由男性患者前尿道取材时，应该用细小拭子伸入尿道口2~4cm，取出分泌物应略带粘膜。从女性患者宫颈取材时，应先用温水湿润扩阴器（不能用液体石蜡等润滑油）。应让棉拭充足吸附分泌物。从直肠取材时，应将棉拭插入肛门2.5cm以上，假如棉拭碰到粪便，应换一个棉拭重取。检验淋菌性咽炎时，应从扁桃体及扁桃体窝取材。为了提升阳性率，可同时取二份标本进行培养。

（2）培养基

因为淋球菌营养要求复杂，所用培养基中应含有动物蛋白及细菌和生长所需多个因子。现在中国常见是血液琼脂或巧克力琼脂。为抑制杂菌，在培养基中可加入少许抗菌素和淋球菌增菌剂，使大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在平皿中几乎呈纯培养，从而提升分离阳性率。

（3）培养条件

淋球菌对外环境改变颇为敏感，对严寒和干燥抵御力很弱。所以，取材后应立即接种。接种平皿应先放在37℃温箱中预温。

培养最适温度为35℃~36℃，超出38.5℃或低于30℃便生长不良。

最初从人体分离时，需用5%二氧化碳环境，为保持一定湿度，可在培养缸中放些湿棉球。

2．结果

淋球菌平皿上经24~48小时培养后，可形成椭圆形、凸起、浸润、光滑、半透明或灰白色菌落。边缘呈花瓣状，用接种环触之有粘性。如继续培养，菌落面积增大，表面变得粗糙，边缘出现皱缩。从菌落上取材涂片，形态有25%较为经典，其它75%为单球菌、四联形或八叠形。

3．注意事项

（1）取材是培养取得成功关键。因为淋球菌好发于柱状上皮细胞，取