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PCR上岗证考核试题及答案解析

一、单项选择题（共10题，每题3分，共30分）

PCR技术扩增目的基因的核心原理是（）

A.DNA半保留复制B.基因重组C.转录过程D.逆转录反应

下列哪种物质不属于PCR反应体系的必需成分（）

A.TaqDNA聚合酶B.引物C.限制性内切酶D.dNTPs

PCR反应中，“变性”步骤的温度通常设置为（）

A.55-65℃B.72℃左右C.90-95℃D.37℃

关于引物设计的原则，错误的是（）

A.引物长度一般为18-25bpB.避免引物自身形成发夹结构

C.引物3’端可存在连续互补碱基D.两条引物之间避免互补配对

实时荧光定量PCR（qPCR）与常规PCR的主要区别在于（）

A.不需要引物B.可实时监测扩增过程C.扩增效率更高D.无需变性步骤

PCR实验室“三区划分”不包括下列哪个区域（）

A.试剂准备区B.样本处理区C.凝胶电泳区D.扩增区

导致PCR扩增出现非特异性条带的常见原因是（）

A.引物浓度过低B.退火温度过高C.退火温度过低D.dNTPs浓度不足

TaqDNA聚合酶的最适反应温度是（）

A.55℃B.72℃C.94℃D.37℃

PCR反应中，“延伸”步骤的主要作用是（）

A.使DNA双链解旋B.引物与模板结合C.合成子链DNAD.终止反应

实验室检测中，若阳性对照无扩增曲线，最可能的原因是（）

A.样本中靶基因含量过低B.反应体系污染C.引物或酶失效D.退火温度过高

二、多项选择题（共5题，每题4分，共20分，多选、少选、错选均不得分）

PCR反应的三个关键步骤包括（）

A.变性B.复性（退火）C.延伸D.连接

下列哪些措施可减少PCR扩增的污染（）

A.实验区域严格分区B.使用一次性耗材C.扩增后产物单独处理D.实验器材高压灭菌

影响PCR扩增效率的因素有（）

A.引物特异性B.模板质量C.Mg2?浓度D.循环次数

实时荧光定量PCR常用的荧光化学方法包括（）

A.SYBRGreenI法B.TaqMan探针法C.分子信标法D.化学发光法

PCR实验中，阴性对照的作用是（）

A.监测试剂污染B.验证扩增特异性C.校准标准曲线D.排除假阳性结果

三、判断题（共10题，每题2分，共20分，正确打“√”，错误打“×”）

PCR扩增的产物长度由引物之间的模板序列决定（）

为提高扩增效率，可无限增加Taq酶的用量（）

样本处理过程中，蛋白质的去除不影响PCR结果（）

退火温度越高，引物与模板结合的特异性越强（）

PCR反应中，dNTPs是合成DNA子链的原料（）

实验室中，扩增区的物品可带入试剂准备区（）

非特异性条带的出现可能是由于引物浓度过高（）

实时荧光定量PCR可直接测定扩增产物的浓度（）

Mg2?浓度过高会导致PCR扩增的非特异性增加（）

阳性对照的作用是验证实验体系的有效性（）

四、简答题（共2题，每题15分，共30分）

简述PCR实验室“三区隔离”的意义及各区域的主要功能。

某实验室进行新冠病毒核酸检测时，出现“样本扩增曲线Ct值38，阳性对照Ct值25，阴性对照无扩增”的结果，请问该样本结果应如何判读？并说明理由。

答案及解析

一、单项选择题

A解析：PCR技术模拟体内DNA半保留复制过程，通过温度循环实现目的基因的大量扩增。

C解析：PCR反应必需成分为模板、引物、Taq酶、dNTPs、缓冲液（含Mg2?），限制性内切酶用于DNA切割，非PCR必需。

C解析：变性步骤需高温使DNA双链解旋，通常为90-95℃。

C解析：引物3’端若存在连续互补碱基，易形成二聚体，影响扩增效率，是设计禁忌。

B解析：qPCR通过荧光信号实时监测扩增过程，可定量分析；常规PCR需电泳检测扩增产物。

C解析：PCR实验室三区为试剂准备区、样本处理区、扩增区，凝胶电泳区属于产物分析区，不纳入核心三区。

C解析：退火温度过低会导致引物非特异性结合模板，产生杂带；温度过高则可能导致引物无法结合。

B解析：Taq酶的最适延伸温度为72℃，此时酶活性最高，合成子链效率