微生物培养技术基础.pptxVIP

演讲人：

日期:

微生物培养技术基础

CATALOGUE

目录

01

微生物培养概述

02

培养基配制

03

无菌操作技术

04

培养方法实践

05

微生物鉴定基础

06

质量控制与安全

01

微生物培养概述

培养定义与意义

微生物培养的定义

微生物培养是指通过人工提供适宜的营养物质、温度、pH值及气体环境等条件，使微生物在实验室可控条件下生长繁殖的技术。其核心在于模拟自然生境，实现目标微生物的分离与扩增。

01

科学研究的基石

微生物培养是研究微生物形态、生理特性、代谢途径及遗传机制的基础手段，为微生物分类学、病理学及抗生素开发等提供实验材料。

工业与医学价值

在发酵工业中用于生产抗生素、酶制剂等；在临床医学中用于病原菌鉴定与药敏试验，指导感染性疾病治疗。

生态与环境应用

通过培养特定功能微生物（如降解污染物菌株），可应用于环境修复与废物处理工程。

02

03

04

纯培养技术

液体深层培养

通过平板划线、稀释涂布等方法分离单一菌种，确保实验结果的可靠性，广泛应用于科研与质检领域。

利用发酵罐进行大规模微生物培养，适用于工业化生产（如青霉素、乳酸菌制剂），需严格控制溶氧量、搅拌速率等参数。

常见微生物培养类型

厌氧培养

针对严格厌氧菌（如产甲烷菌、破伤风梭菌），采用厌氧罐或厌氧工作站创造无氧环境，需添加还原剂（如半胱氨酸）维持低氧化还原电位。

共培养与混合培养

模拟自然微生物群落互作关系，用于研究微生物共生机制或复杂代谢过程（如污水处理中的活性污泥系统）。

通过血培养、痰培养等快速鉴定病原体，结合药敏试验为感染性疾病提供精准治疗方案，如结核分枝杆菌的培养与耐药性分析。

利用乳酸菌、酵母菌等生产酸奶、面包及发酵调味品，同时通过培养检测食品中腐败菌或致病菌（如沙门氏菌）以确保安全性。

基因工程中常用大肠杆菌、毕赤酵母作为宿主菌，通过培养扩增重组DNA以生产胰岛素、疫苗等生物制品。

培养特定指示菌（如大肠菌群）评估水质污染程度，或筛选降解石油、塑料的功能菌株用于污染治理。

应用领域简介

医学诊断

食品工业

生物技术

环境监测

02

培养基配制

培养基成分与分类

基础成分与功能

培养基通常包含碳源（如葡萄糖）、氮源（如蛋白胨）、无机盐（如磷酸盐）、生长因子（如维生素）和水。根据微生物需求可分为合成培养基（化学成分明确）和复合培养基（含天然成分如酵母提取物）。

选择性培养基

通过添加特定抑制剂（如抗生素或染料）仅允许目标微生物生长，如麦康凯培养基分离肠道杆菌。

鉴别性培养基

利用指示剂（如酚红）或底物反应（如乳糖发酵）区分微生物特性，如EMB培养基鉴别大肠杆菌的金属光泽菌落。

特殊用途培养基

包括厌氧培养基（添加还原剂如巯基乙酸钠）、高渗培养基（用于嗜盐菌）及细胞培养专用培养基（如RPMI-1640）。

固体/液体培养基制备

4

分装与储存规范

3

半固体培养基应用

2

液体培养基关键控制点

1

固体培养基制备流程

液体培养基分装后标注批号与有效期（通常4℃保存1个月），固体平板需倒置存放以减少冷凝水影响，预还原培养基需厌氧环境保存。

避免高温长时间加热导致成分降解，灭菌后需检查澄清度与pH值，振荡培养时需控制装液量（不超过容器容积1/3以防溶氧不足）。

添加0.3-0.5%琼脂用于动力试验（如SIM培养基）或短期菌种保藏，其软胶状结构便于观察微生物扩散现象。

精确称量各组分→溶解于蒸馏水→调节pH至7.2-7.4→加入琼脂（1.5-2.0%）→121℃高压灭菌20分钟→冷却至50℃后倾注无菌平板。

标准条件为121℃、15psi维持15-30分钟，适用于耐热培养基、玻璃器皿，需定期校准压力表并验证灭菌效果（如生物指示剂枯草芽孢杆菌测试）。

高压蒸汽灭菌

160-180℃维持2小时，适用于玻璃器皿和金属器械，需注意物品堆积不超过灭菌柜容积2/3以保证热穿透。

干热灭菌

针对热敏感成分（如抗生素、血清）使用0.22μm微孔膜过滤，操作需在超净台中进行，滤膜需进行完整性测试（如起泡点试验）。

过滤除菌

包括化学指示卡（颜色变化）、生物监测（嗜热脂肪芽孢杆菌培养）及培养基无菌试验（37℃孵育48小时确认无污染）。

灭菌效果验证

灭菌方法与验证

03

无菌操作技术

无菌工作台使用规范

操作者需穿戴无菌手套、口罩及实验服，手臂避免频繁跨越开放容器，减少说话和咳嗽等动作。

个人防护与行为规范

实验前后需用75%酒精擦拭台面，物品按洁净程度分区放置（如无菌器材靠近高效过滤器，废弃物置于边缘）。

台面清洁与物品摆放

保持垂直层流风速在0.3-0.5m/s，操作区域应限制在离高效过滤器15cm范围内，避免外界气流干扰。

气流控制与操作区域划分

使用前需开启紫外线灯照射30分钟以上，确保工作台内表面及空气无菌，操作时关闭紫外线灯以避免对人体伤害。

紫外线