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GB/T43169—2023
马铃薯斑纹病菌检疫鉴定方法
1范围
本文件描述了马铃薯斑纹病菌的检疫鉴定方法。
本文件适用于茄科和伞形科等植物的种子、种苗、块茎、块根等植物材料以及传播介体木虱中马铃薯斑纹病菌的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文本必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4马铃薯斑纹病菌基本信息
中文名称:马铃薯斑纹病菌
拉丁学名:candidatusLiberibactersolanacearumLieftingetal.,2009
英文名称:zebrachipdisease,zebracomplex
中文异名:斑马片病、马铃薯斑纹片病菌
同物异名:candidatusLiberibacterpsyllaurousHansenetal.,2008
分类地位:原核生物界(kingdomMonera),变形菌门(Proteobacteria),α-变形菌纲(Alphapro-teobacteria),根瘤菌目(Rhizobiales),叶杆菌科(Phyllobacteriaceae),韧皮部杆菌属(candidatusLiberibacter)。
马铃薯斑纹病菌其他信息见附录A。
5方法原理
马铃薯斑纹病菌目前还无法培养,因此方法原理为采用马铃薯斑纹病菌特异性引物或探针,通过普通聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)、巢式PCR或实时荧光PCR方法进行检测。
6仪器设备和主要试剂
6.1仪器设备
6.1.1实时荧光PCR仪
支持寡核苷酸探针(TaqMan)双标记水解探针,温度控制范围为30℃~100℃。
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GB/T43169—2023
6.1.2PCR仪
温度控制范围为4℃~99℃。
6.1.3核酸分析仪
波长为230nm~260nm。
6.1.4超净工作台
洁净等级100级,过滤效率达到99.99%。
6.1.5电泳仪
电压10V~300V,最小可调1V;电流4mA~400mA,最小可调1mA。
6.1.6凝胶成像分析仪
紫外透射波长为302nm。
6.1.7研磨机
转速为50r/min~600r/min。
6.1.8台式小型离心机
转速≥12000r/min。
6.1.9旋涡振荡器
转速为200r/min~3000r/min。
6.1.10微量进样器
量程为0.2μL~2.5μL、1.0μL~10μL、10μL~100μL、100μL~1000μL。
6.1.11电子天平
精确度为0.001g。
6.1.12水浴锅
温度控制范围为室温至100℃。
6.1.13纯水仪
制备出的纯水水质应符合GB/T6682中一级水的规格。
6.1.14高压灭菌器
最高工作温度不低于121℃。
6.2主要试剂
除另有规定外,所有试剂均为分析纯。磷酸缓冲盐溶液(phosphatebufferedsaline,PBS)、液氮、聚乙二醇辛基苯基醚(Tritonx-100)、PCR缓冲液、脱氧核糖核苷酸三磷酸(dNTPs)、脱氧核糖核酸(de-
GB/T43169—2023
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oxyribonucleicacid,DNA)聚合酶、引物和探针、琼脂糖、三氯甲烷、异丙醇、无水乙醇、双重去离子水(doubledistilledwater,ddH2O)。
7病菌的鉴定
7.1症状检查
该病菌在不同寄主甚至同一寄主不同品种上的为害症状及为害程度均有差异。马铃薯、番茄可检查植株地上部分,主要表现为叶片黄化矮化、叶脉变色、全株叶片向上卷曲、叶片焦枯、腋芽增生、节间缩短肿大、气生块茎、果实畸形发育停滞;此外,
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