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;壹、WesternBlot简介
二、WesternBlot壹般流程
三、WesternBlot成像系统
四、WesternBlot常見問題分析;;壹、WesternBlot長处
高辨别率的電泳技术
特异敏感的抗原-抗体反应
1-5ng中等大小的靶蛋白;;蛋白样品的制备 SDS電泳
转膜（PVDF或NC膜）封闭 壹抗洗涤 酶標二抗反应 洗涤 显影;LB：
62.5mmol/LTris-HCl（pH6.8at25℃）,2%SDS，10%Glycerol(甘油)，50mmol/LDTT(二硫苏糖醇)；溴酚藍
在裂解液中加入合适的蛋白酶克制剂，防止蛋白降解，從而保证检测的精确性！;;蛋白质-SDS胶束的特點：;Bradford法：考馬斯亮藍G-250有紅、藍两种不壹样颜色的形式，在壹定浓度的乙醇和酸性条件下，可配成淡紅色的溶液，与蛋白結合後形成藍色化合物，该化合物在595nm处有最大吸取值，化合物颜色深浅与蛋白的浓度高下成正比。
双缩脲法：Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫藍色络合物，此物在540nm波長处有最大吸取
Lowly法：第壹步就是双缩脲反应，即Cu2+与蛋白质在碱性溶液中形成络合物，然後這個络合物還原磷钼磷-磷钨酸试剂（福林-酚试剂），成果得到深藍色物。;;不持续電泳系统;聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamidegel，简称PAG):
單体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)
交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺
加速剂N,N,N,N-四甲基乙二胺(TEMED)
催化剂過硫酸铵
三维网状构造的凝胶，该凝胶化學惰性强，具有壹定的机械强度和透明度，是良好的電泳介质，以此凝胶為支持物的電泳称為聚丙烯酰胺凝胶電泳(polyacrylamidegelelectrophoresis，简称PAGE)。;凝胶浓度与蛋白分离范围;;灌制分离胶;;;電泳;转膜;膜的选择;;转膜;半干转移系统;封闭;壹抗、二抗孵育;二抗与底物反应显色;洗脱抗体;三、显色;Tanon5200性能特點;Tanon5200软件特點;胶不平？
凝胶漏液？;?条带比正常的窄？
?“微笑”或“倒微笑”条带？;? 凝胶肿胀或卷曲？
? 条带歪斜或漂移？
? 單個或多种白點？
? 转膜缓冲液過热？;1. 膜没有均匀浸湿
2. 膜或者缓冲液污染
3. 封闭不充足
4. 抗体与封闭剂出現交叉反应
5. 抗体浓度過高;
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