流式细胞技术及其应用.pptVIP

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2025-11-14 发布于广东
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流式细胞技术及其应用.ppt

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§4.1.4荧光染色对照的设置第61页，共86页，星期日，2025年，2月5日§3.1荧光探针的选择1.根据仪器类型选择荧光探针FACSort配有488nm单激光器。FACSCalibur配有488nm和633nm双激光器。2.根据荧光强度大小选择荧光探针各种荧光色素有不同的发射荧光强度。在多色免疫荧光分析中，应选择荧光强度最强的荧光色素标记的单克隆抗体，尤其是对于表达量较低抗原的分析更是如此。第29页，共86页，星期日，2025年，2月5日常用荧光染料的特性荧光染料分子量激发波长(nm)发射波长(nm)颜色用途FITC390488525深蓝免疫荧光PE240000488575橙色免疫荧光PerCP35000488677红色免疫荧光PeCy5224000488670红色免疫荧光PeCy7224000488755深红色免疫荧光PI488620橙红色免疫荧光APC104000633670红色免疫荧光第30页，共86页，星期日，2025年，2月5日异硫氰酸荧光素

（fluoresceinisothiocyanate，FITC）

FITC是一种最为常见的荧光探针，其分子量为389Da，用488nm的激光激发后发射荧光的峰值在520nm附近，使用530±15nm的带通滤光片可得到最佳的荧光检测信号。FL1探测器检测FITC。§3.1荧光探针的选择第31页，共86页，星期日，2025年，2月5日藻红蛋白

(p-phycoerythrin,PE)

PE是在红藻中所发现的一种可进行光合作用的自然荧光色素，分子量为240kD的蛋白，当使用488nm激光激发时其发射荧光峰值约为576nm，对于单激光器的流式细胞仪来说，推荐使用585±21nm的带通滤光片，双激光器的流式细胞仪推荐使用575±13nm的带通滤光片。FL2探测器检测PE。§3.1荧光探针的选择第32页，共86页，星期日，2025年，2月5日多甲藻叶绿素蛋白

（peridininchlorophyllprotein，PerCP）

PerCP是在甲藻和薄甲藻的光学合成器中发现的，是一种蛋白复合物，分子量约为35kD，当被488nm氩离子激光激发后，发射光的峰值约为677nm。FL3探测器检测PerCP。§3.1荧光探针的选择第33页，共86页，星期日，2025年，2月5日§3.1荧光探针的选择碘化丙啶（propidiumiodide，PI）可选择性地嵌入核酸（DNA、RNA）的双螺旋碱基对中。在对DNA染色时，需用RNase对细胞进行处理，以排除RNA对DNA荧光定量精度的影响。在488nm波长激发下，PI的发射光谱为610-620nm。在FL2探测器检测。FL2探测器检测PI。第34页，共86页，星期日，2025年，2月5日§3.2免疫荧光染色直接免疫荧光染色法多用于对细胞表面标志的染色分析。选用单克隆荧光抗体是直接针对细胞表面抗原特异性标志的单一抗体，一个抗体针对一个抗原。特异性强，荧光标记干扰因素少，但需购买多种荧光标记