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免疫学制度操作规程

一、概述

免疫学制度操作规程旨在规范免疫学相关实验的操作流程，确保实验结果的准确性、可靠性和可重复性。本规程适用于各类免疫学实验，包括但不限于细胞免疫、体液免疫、免疫印迹、流式细胞术等。遵循本规程有助于提高实验效率，降低操作风险，并确保实验人员的安全。

二、实验准备

（一）试剂与耗材

1.试剂：确保所有试剂均为分析纯或更高等级，使用前需检查有效期和储存条件。

2.耗材：包括移液器吸头、离心管、培养皿、ELISA板等，需确保无菌且清洁。

（二）仪器设备

1.离心机：检查转速和平衡状态，确保运行稳定。

2.酶标仪：校准波长和读数范围，确保检测准确性。

3.流式细胞仪：预热并校准荧光通道，确保数据一致性。

（三）环境要求

1.实验室温度：维持在20–25℃之间，湿度控制在40–60%。

2.空气洁净度：使用超净工作台或生物安全柜，确保无菌操作。

三、操作流程

（一）样本处理

1.细胞样本：

(1)解冻细胞样本，用PBS缓冲液洗涤3次，每次1000rpm离心5分钟。

(2)重悬细胞，计数并调整细胞浓度至1×10^6/mL。

2.血清样本：

(1)解冻血清样本，用0.22μm滤膜过滤除菌。

(2)稀释至所需浓度，避免反复冻融。

（二）免疫学实验操作

1.ELISA实验：

(1)将ELISA板用封闭液孵育2小时，室温避光。

(2)加入待测样本或标准品，孵育1小时。

(3)洗涤3次，加入酶标抗体，孵育1小时。

(4)加入底物，避光反应30分钟，酶标仪检测吸光度值。

2.免疫印迹实验：

(1)电泳分离蛋白质，转移至PVDF膜，封闭1小时。

(2)加入一抗，4℃孵育过夜。

(3)洗膜3次，加入二抗，室温孵育1小时。

(4)化学发光检测，成像并定量分析。

（三）数据记录与处理

1.记录实验参数：包括试剂批号、仪器校准时间、样本编号等。

2.数据分析：使用GraphPadPrism或Excel软件进行统计分析，计算IC50值或相对表达量。

四、安全与废弃物处理

（一）个人防护

1.佩戴实验服、手套、护目镜，必要时使用口罩。

2.操作生物样本时，避免接触皮肤和眼睛。

（二）废弃物处理

1.沉淀物和离心管可按常规生物废弃物处理。

2.液体废弃物需用75%酒精消毒后倒入指定容器。

（三）设备清洁

1.每次实验后需清洗仪器，特别是酶标仪和流式细胞仪的镜头。

2.定期消毒超净工作台和生物安全柜，使用70%酒精喷洒表面。

五、注意事项

1.所有实验需在无菌条件下进行，避免交叉污染。

2.试剂配制需精确称量，避免误差。

3.实验过程中需及时记录数据，避免遗漏。

4.如遇异常情况（如样本污染、仪器故障），立即停止实验并报告。

**一、概述**

免疫学制度操作规程旨在规范免疫学相关实验的操作流程，确保实验结果的准确性、可靠性和可重复性。本规程适用于各类免疫学实验，包括但不限于细胞免疫、体液免疫、免疫印迹、流式细胞术、ELISA、免疫荧光等。遵循本规程有助于提高实验效率，降低操作风险，并确保实验人员的安全。本规程涵盖了从实验准备、样本处理、实验操作到数据记录、安全防护及废弃物处理的全部流程，是免疫学实验室日常工作的基本指导文件。

二、实验准备

（一）试剂与耗材

1.试剂：

(1)**缓冲液**：磷酸盐缓冲液（PBS）、Tris缓冲盐溶液（TBS）、吐温20（Tween-20）等，需根据实验需求配制并过滤除菌（0.22μm滤膜）。

(2)**封闭液**：5%脱脂奶粉或10%牛血清白蛋白（BSA），用无脂奶粉或BSA溶解于PBS或TBS中，使用前需新鲜配制。

(3)**洗涤液**：PBS或TBS加入0.05%Tween-20，用于洗涤实验板或膜，减少背景干扰。

(4)**抗体**：包括一抗（如兔抗人IgG）、二抗（如辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG），需检查储存条件（通常是-20℃或-80℃）和有效期，使用前需用封闭液或相应缓冲液进行适当稀释。

(5)**底物**：如TMB（3,3-二氨基联苯胺四氢盐）或ECL（化学发光底物），需现用现配或按说明书保存，注意避光保存。

(6)**其他试剂**：如甘氨酸（用于SDS）、SDS（十二烷基硫酸钠）、乙醇（用于固定和脱水）、二甲亚砜（DMSO，用于细胞冻存）等，需确保纯度符合实验要求。

2.耗材：

(1)**移液器吸头**：根据实验需求选择不同规格（如100μL、200μL、1000μL），优先使用一次性无菌吸头，避免交叉污染。

(2)**离心管**：聚丙烯（PP）或聚四氟乙烯（PTFE）材质，根据实验需求选择不同规格（如1.5mL、2mL、15mL），需预冷（如用于低温离心）。

(3)**培养皿/板**：细胞培养